Patrón para evaluación de retención de péptidos

El estándar de retención de péptidos Thermo Scientific Pierce es una mezcla de cinco amidas de decapéptidos de C-terminal que ofrecen perfiles de elución de referencia en HPLC de fase inversa.

Características del estándar de retención de péptidos:

•Determinación del orden relativo de la elución de péptidos a partir de una mezcla compleja
• Predicción eficaz de los perfiles de elución de péptidos para simplificar la identificación y ahorrar tiempo de purificación
• Identificación de péptidos de composición de aminoácidos conocidos en columnas de HPLC de fase inversa
• Monitorización del rendimiento de la columna: Eficacia, selectividad y resolución durante el envejecimiento de las columnas
• Evaluación de soportes de fase inversa de longitudes de cadena de n-alquilo y densidades de ligandos
• Comparación de columnas de fase inversa de diferentes fabricantes

El estándar de retención de péptidos permite una predicción exacta del tiempo de elución para péptidos de composición de aminoácidos conocidos de hasta 20 residuos de longitud.El estándar de referencia ayuda a predecir el orden relativo de la elución de péptidos en una mezcla compleja, simplificando la identificación de los péptidos especificados y ahorrando tiempo en la purificación de péptidos.Al probar el estándar con frecuencia durante toda la vida útil de una columna, es posible supervisar las características de rendimiento, como la eficacia, la selectividad y la resolución durante el envejecimiento de la columna.El estándar también se puede utilizar para evaluar diferentes soportes de fase inversa de diferentes longitudes de cadena de n-alquilo y densidad de ligandos, así como columnas de diferentes fabricantes.

El estándar de retención de péptidos consta de cinco decapéptidos de amidas de C-terminal, indicados de S1 a S5, con la fórmula genérica Ac-Arg-Gly-X-Gly-Leu-Gly-Lys-Amide.Cuatro de estos péptidos están acetilados con la variación de secuencia de la siguiente manera:Gly3-Gly4, Ala3-Gly4, Val3-Gly4 y Val3-Val4.El quinto péptido, Ala3-Gly4, contiene un grupo libre de Na-amino.Esta mezcla proporcionará 100-200 inyecciones (aproximadamente 0,1 mg de cada péptido) a 0,1 AUFS a 210 nm.El estándar de retención de péptidos se suministra como película seca en un vial sellado.

Guo, et al. desarrollaron un método simple y cuantitativo para predecir los tiempos de retención de péptidos(1985, 1986).Los tiempos de retención se pronostican sumando los valores que representan la contribución en minutos de cada residuo de aminoácidos y de los grupos terminales de péptidos.

El tiempo de retención depende del peso molecular del péptido.El efecto sobre la retención es relativamente poco importante con un péptido pequeño, pero aumenta en función del tamaño de la molécula.La precisión en la predicción del tiempo de retención de péptidos se reduce considerablemente si se superan los 20 residuos.Para garantizar la precisión, se emplea un estándar de péptidos con el fin de corregir la variación del instrumento, el envejecimiento de las columnas, la variación de longitud de la cadena n-alquil y la densidad del ligando.