Sulfo-SBED Biotin Label Transfer Reagent, No-Weigh™ Format

El reactivo de transferencia de etiquetas de biotina Thermo Scientific Pierce Sulfo-SBED es un reactivo multifuncional para etiquetar una proteína purificada y, a continuación, transferir covalentemente la etiqueta de biotina adjunta a interactores específicos de esa proteína.

Sulfo-SBED es la abreviatura de Sulfo-N-hidroxisuccinidil-2-(6-[biotinamido]-2-(p-azido benzamido)-hexanoamido) etil-1,3'-ditiopropionato. Es un entrecruzador químico heterobifuncional capaz de acoplarse covalentemente a aminas primarias en un extremo y a casi cualquier grupo funcional de proteínas en el otro extremo A diferencia de los entrecruzadores típicos, el Sulfo-SBED también incluye un grupo de biotina y un agente separador de disulfuro separable. Estas características permiten entrecruzar secuencialmente proteínas que interactúan y transferir la etiqueta de afinidad de la biotina de una proteína (es decir, una proteína de «cebo» purificada) a otra (posiblemente proteína de «presa» desconocida). La transferencia de etiquetas es un poderoso método in vitro para descubrir la interacción de proteínas. Un número creciente de publicaciones incluyen el uso del reactivo de transferencia de etiquetas Sulfo-SBED Biotin para identificar elementos de unión de interacción de proteínas previamente desconocidos y para caracterizar más plenamente los dominios de unión de proteínas específicos de otras interacciones de proteínas.

Protocolo típico para el experimento de transferencia de etiquetas:

• Añada unos cuantos microlitros de reactivo Sulfo-SBED disuelto a 0,5-1 ml de proteína de cebo purificada en PBS.
• Incube la mezcla durante 30-120 minutos en hielo o a temperatura ambiente en la oscuridad.
• Desale o dialice (con luz tenue) para eliminar el exceso de Sulfo-SBED no reaccionado de la proteína de cebo etiquetada.
• Añada la proteína de cebo etiquetada al lisado celular o a otra solución que contenga los supuestos interactores de proteínas diana (presa).
• Cuando se hayan formado complejos de interacción, exponga la solución a la luz ultravioleta (365 nm) durante varios minutos.
• Analice los productos mediante uno de los siguientes métodos:
• Inmunotransferencia (Western Blotting): Separe entrecruzamientos en DTT, separe proteínas por SDS-PAGE y detectee bandas biotiniladas por Western blotting con estreptavidina-HRP.
• Purificación y espectrometría de masas o secuenciación: Purifique por afinidad proteínas biotiniladas o fragmentos de péptidos después de la digestión con tripsina y realice MS o secuenciación para caracterizar las proteínas involucradas.

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