El sistema de inmunoensayo de AMP cíclico de 96 pocillos cAMP-Screen Direct™ permite la determinación ultrasensible de los niveles de AMP cíclico (cAMP) en lisados celulares. Este inmunoensayo quimioluminiscente y competitivo está disponible en un formato que garantiza la máxima flexibilidad para permitir adiciones manuales de reactivos o procesamientos automatizado de alto rendimiento. El ensayo de cAMP combina un sustrato quimioluminiscente y altamente sensible CSPD™ con el potenciador SAPPHIRE-II™ que se activa con un conjugado enzimático compuesto por cAMP unido a fosfatasa alcalina (cAMP-AP). La formulación de sustrato/potenciador quimioluminiscente es un reactivo listo para su uso que genera una emisión de luz de brillo constante a partir de los 30 minutos después de la adición. Este ensayo se utiliza principalmente en el cribaje secundario y en la investigación preclínica, donde la sensibilidad y la ausencia de falsos positivos son esenciales.

• Más sensibilidad que cualquier otro ensayo de cAMP disponible en el mercado
• Horas de tiempo de lectura con poca o ninguna degradación de la señal
• Protocolo sencillo con células cultivadas directamente en la placa de ensayo
• Útil para una amplia variedad de estudios de activación de receptores

Alta sensibilidad y horas de resplandor constante
Este ensayo quimioluminiscente está diseñado para proporcionar más sensibilidad que cualquier otro ensayo de cAMP disponible en el mercado. Se pueden detectar hasta 60 femtomoles de cAMP. El ensayo tiene un amplio rango dinámico, por lo que es capaz de detectar de 0,06 a 6 000 picomoles de cAMP sin necesidad de diluir o manipular las muestras como en la acetilación. Esto es especialmente útil en ensayos basados en células, ya que se mide la estimulación y la inhibición de los agonistas o antagonistas acoplados a GS o Gi. La precisión intraensayo para las muestras duplicadas suele ser del 5 % o menos. Una vez que la formulación sustrato/potenciador alcanza la señal de brillo, la placa se puede leer durante horas con poca o ninguna degradación de la señal. Esto es útil en procesos de cribaje en los que se comparan varias placas entre sí. Además, el ensayo muestra una reactividad cruzada excepcionalmente baja con otros nucleótidos cíclicos o que contienen adenosina.

Para estudios de activación de receptores
El sistema cAMP-Screen Direct™ está diseñado para la cuantificación de cAMP celular para ensayos funcionales de activación de receptores. El ensayo se ha utilizado con líneas celulares establecidas para mediciones funcionales con receptores endógenos, líneas celulares con receptores de ligando exogenados expresados en la superficie celular, cultivos celulares primarios y tejidos en respuesta al tratamiento con los ligandos apropiados. Además, se ha utilizado para la caracterización de receptores, la identificación de receptores huérfanos con ligandos y la caracterización de nuevos receptores quiméricos. El ensayo se puede utilizar para cribaje de alto rendimiento de compuestos que estimulan o interfieren con estas vías de transducción de señales.

Un protocolo sencillo: no se requiere transferencia de lisados
El ensayo sigue un protocolo sencillo. Las células se siembran en placas, se cultivan y se tratan con compuestos de prueba según se requiera. Los lisados celulares se preparan en presencia o ausencia de medios de cultivo. Los lisados se incuban con un conjugado cAMP-AP y un anticuerpo anti-cAMP en una microplaca recubierta; los complejos inmunes resultantes se capturan en la placa. En muestras sin cAMP, todo el conjugado cAMP-AP se captura en la superficie recubierta, lo que da como resultado una alta señal. En presencia de cAMP, la cantidad de conjugado cAMP-AP capturado disminuye como resultado de la competencia por la unión con el cAMP sin etiquetar, lo que hace que la señal se reduzca. Esta reducción de la señal es proporcional a la cantidad de cAMP presente en el lisado celular. Después del proceso de lavado para eliminar el cAMP-AP no ligado, se añade el sustrato quimioluminiscente y se mide la señal de brillo resultante con un luminómetro.

Este sistema Camp-Screen Direct™ ofrece las mismas ventajas que el sistema cAMP-Screen™, pero también elimina la necesidad de transferir los lisados celulares de una placa de cultivo tisular a las microplacas prerrecubiertas, ya que las células pueden cultivarse directamente en las microplacas. Esto proporciona una mejor precisión de ensayo con un paso de transferencia menos. Muchos tipos de células diferentes se han cultivado con éxito en las microplacas preutilizadas, que también tienen un fondo claro para permitir la supervisión de las células.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso diagnóstico o terapéutico en humanos ni en animales.