Mezclas de sustancia añadida de ARN ERCC ExFold

Las mezclas de sustancias añadidas de ARN ERCC ExFold proporcionan un conjunto de controles de ARN externos que permiten la evaluación del rendimiento de una variedad de plataformas tecnológicas utilizadas para experimentos de expresión génica. Agregue una mezcla de sustancias añadidas a cada muestra de ARN y ejecute las muestras que contienen mezcla de sustancias añadidas en su plataforma. A continuación, compare los datos de mezcla de sustancias añadidas con las concentraciones y proporciones conocidas de mezcla de sustancias añadidas para evaluar el rango dinámico, el límite inferior de detección y la respuesta de cambio de plegado de su plataforma. Una serie de tecnologías de expresión génica pueden beneficiarse del uso de las mezclas de ARN espirado ERCC ExFold, incluyendo secuenciación de próxima generación (NGS), microarreglos y ensayos basados en PCR. Los microarreglos deben contener sondas diseñadas para interrogar las transcripciones de ERCC para beneficiarse del uso de las mezclas de ARN espirado de ERCC ExFold. Consulte con el fabricante de la matriz para obtener más información. Características principales del producto:

• Lograr una medida estándar para la comparación de datos en experimentos de expresión génica
• Medir la sensibilidad (límite inferior de detección) y el rango dinámico de un experimento
• Expresión génica diferencial cuantitaria

Por qué se necesitan controles de ARN externos
La variación en los datos de expresión de ARN puede atribuirse a una variedad de factores, incluyendo la calidad del material de partida, el nivel de celularidad y el rendimiento de ARN, la plataforma empleada, y la persona que realiza el experimento. Para controlar estas fuentes de variabilidad, una serie de controles externos de ARN han sido desarrollados por el Consorcio de Control Externo de ARN (ERCC), un grupo ad hoc de organizaciones públicas, privadas y académicas dirigido por el National Institute of Standards and Technology (NIST, Instituto estadounidense de normas y tecnología), ha desarrollado un conjunto común de controles externos de ARN. Los controles constan de un conjunto de transcritos poliadenilados y sin marcar diseñados para añadir a los experimentos de análisis de ARN tras el aislamiento de la muestra para compararlas con un conjunto de criterios de rendimiento. Antes del diseño de estos controles universalmente aceptados resultaba difícil ejecutar una investigación exhaustiva de métricas fundamentales de rendimiento analítico. La marca de confianza en reactivos de ARN de calidad ha llevado al mercado las mezclas de control de sustancias añadidas de ERCC ExFold, así como mezclas preformuladas de 92 transcritos derivados y trazables de plásmidos de ADN certificados con la certificación NIST. Las transcripciones están diseñadas para ser de 250 a 2000 nt de longitud, que imitan los ARNm eucarióticos naturales.

Desbloquear el potencial del análisis de ARN
El análisis de ARN, incluyendo el perfilado de la expresión génica y el estudio completo del transcriptoma, puede conducir a una mejor comprensión de los patrones de expresión en los estados de la enfermedad y proporciona una mayor comprensión de las vías biológicas y los mecanismos moleculares que regulan el destino celular, el desarrollo y la progresión de la enfermedad. Los métodos tradicionales para el análisis de ARN, como la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) y los microarreglos, tienen una eficacia demostrada. En la actualidad, los sustituye la secuenciación de última generación, una alternativa digital de gran rendimiento. Debido a que cada método utiliza múltiples plataformas, y con la necesidad de comparar varias muestras a través de plataformas en todo el mundo, una medida estándar para la comparación de datos es necesaria. A medida que las capacidades del análisis de ARN se expandan, la necesidad de crear una visión estandarizada de los datos será aún más importante.

Lograr y comparar resultados con precisión confirmada
Las mezclas de sustancias añadidas de ARN ERCC ExFold se utilizan para crear una medición de referencia estándar de ARN tanto dentro de un experimento como a través de múltiples experimentos realizados utilizando varias muestras y plataformas. Gracias a las dos formulaciones de mezcla de sustancia añadida (consulte la figura), se pueden examinar varias mediciones, como la sensibilidad y el rango dinámico, para evaluar los distintos parámetros en un experimento o varios (consulte la figura). Además, las relaciones de cambio de expresión entre dos muestras se pueden calcular con un alto grado de confianza mediante la relación altamente concordante entre la sustancia añadida de ARN ExFold 1 y la sustancia añadida de ARN ExFold 2 (consulte la figura). Las mediciones se determinaron a través de concentraciones molares conocidas para cada transcripción dentro de spike-in mix y a través de asociación de las dos mezclas utilizando una combinación de relaciones a través de 4 subgrupos diferentes de los 92 transcritos. Los controles son ideales para experimentos de secuenciación de próxima generación, como en SOLiD™ System, y plataformas de microarreglos compatibles, como el Illumina™ Sentrix™ BeadChip.

Elija entre las opciones flexibles para las configuraciones del kit ERCC
Ya sea para medir el rango dinámico o la expresión génica de cambio-plegado, las mezclas de control de sustancias añadidas ERCC están disponibles en dos configuraciones de kit para satisfacer sus necesidades experimentales. Utilice la mezcla de control de sustancia añadida de ERCC para determinar el rango dinámico y el límite inferior de detección de la plataforma. Utilice las mezclas de sustancias añadidas de ERCC ExFold para evaluar la precisión de las mediciones de expresión génica diferencial.

	Mezcla de sustancia añadida de ARN de ERCC 1*	Mezcla de sustancia añadida ExFold 1*	Mezcla de sustancia añadida ExFold 2*	Agua libre de nucleasas
Mezcla de sustancia añadida de ARN de ERCC (n.º de cat. 4456740).	10 μl	—	—	1,75 ml
Mezclas de sustancias añadidas de ARN de ERCC ExFold (n.º cat. 4456739)	—	10 μl	10 μl	1,75 ml

* Aunque la mezcla de sustancia añadida de ARN de ERCC 1 y la mezcla de sustancia añadida ExFold 1 contienen la misma formulación de transcripciones de ERCC, no sustituya la mezcla de sustancia añadida de ARN de ERCC 1 por la mezcla de sustancia añadida ExFold 1 para la evaluación de cambio-plegado. Utilice solo las mezclas de sustancias añadidas ExFold 1 y 2 con el mismo número de lote de fabricación.