RapidFinder™ STEC Screening Assay

El ensayo de detección de STEC Applied Biosystems™ RapidFinder™ forma parte de un flujo de trabajo de detección y confirmación completo y validado que permite la detección de PCR en tiempo real TaqMan™ de E. coli productora de toxinas Shiga (STEC) O157:H7 y Big 6 serogrupo no O157:H7 (O26, O45, O103, O111, O121 y O145) en una gran variedad de productos de carne de vacuno. El ensayo de detección de STEC RapidFinder se desarrolló en colaboración con el USDA-ARS y contiene 96 ensayos completos de qPCR dirigidos a detectar la toxina 1 y 2 de Shiga (stx1/stx2), las eae y la posible presencia de O157:H7. El ensayo está diseñado para incluir todas las variantes alélicas de stx y eae, incluidos stx2g y stx2f. Todas las reacciones incluyen un control positivo interno (IPC) y referencia pasiva ROX™. Las muestras evaluadas como negativas no requieren más pruebas. Las muestras evaluadas como positivas deben analizarse posteriormente con el ensayo de confirmación de STEC RapidFinder™.

El flujo de trabajo de detección de STEC RapidFinder proporciona:
• Mayor confianza en los resultados: parte de un flujo de trabajo validado para la detección de tan solo 1-5 UFC de STEC patógena en su muestra
• Flujo de trabajo simplificado: detección simultánea de E. coli O157:H7 y las 6 grandes cepas que no son O157:H7 en muestras de carne de vacuno de 375 g con un formato de detección liofilizado de un solo paso y tubo cerrado que se ajusta a su programa de pruebas existente
• Posibilidad reducida de resultados falsos: mediante el uso de preparación de ADN de alta calidad, diseño de ensayo patentado y control positivo interno
• Detección el mismo día de STEC patógenos y eliminación de muestras de carne de vacuno negativas para STEC en tan solo 12 horas, lo que respalda la liberación temprana del producto
• Costes y espacio de laboratorio minimizados con el uso de un volumen menor de un medio de enriquecimiento de un solo paso no patentado, lo que elimina la necesidad de comprar medios patentados.
• Compatibilidad con el software RapidFinder™ Express v.1.2 y versiones posteriores: permite la detección e interpretación de los resultados de forma sencilla y automática de presencia/ausencia

Los estudios han demostrado que los ensayos de STEC RapidFinder tienen un alto nivel de sensibilidad y especificidad para E. coli O157:H7 y las 6 grandes cepas de STEC que no son O157*. Detectaron todas las cepas de inclusión y no mostraron reactividad cruzada con ninguna de las cepas de exclusión analizadas. Los ensayos stx detectaron todas las variantes conocidas de stx1 y stx2, incluidas stx2f y stx2g. El flujo de trabajo optimizado desarrollado conjuntamente con USDA-ARS mostró una detección equivalente al método de referencia MLG, y el control positivo interno en ambos ensayos reduce significativamente el riesgo de falsos negativos.

Aplicaciones
El flujo de trabajo de detección de STEC RapidFinder se ha diseñado para que lo utilicen analistas microbiológicos que necesitan realizar pruebas de STEC en muestras de carne de vacuno. Combinado con el sistema de RT-PCR Applied Biosystems 7500 Fast, los ensayos de detección y confirmación de STEC RapidFinder proporcionan una solución completa para la detección, identificación y confirmación rápidas de las 6 grandes STEC y E. coli 0157:H7 para cumplir con los requisitos de importación y exportación para la industria de la carne de vacuno. Los flujos de trabajo específicos se detallan en las siguientes figuras e incluyen el aislamiento de ADN automatizado y basado en columna giratoria y la detección por PCR en tiempo real de E. coli O157:H7 y las 6 grandes cepas que no son O157 en muestras de carne de vacuno.

Software RapidFinder Express
Cuando se integra en el flujo de trabajo de detección de STEC RapidFinder, el Software RapidFinder Express automatiza la interpretación de datos y genera instrucciones para el usuario sobre cómo debe proceder con una muestra. Las pantallas de datos están disponibles para usuarios principiantes y avanzados, que muestran llamadas simples de presencia/ausencia o archivos de datos sin procesar utilizando el software 7500 Fast System SDS.

Los ensayos de detección y confirmación de STEC RapidFinder cumplen con las pautas del USDA FSIS
El flujo de trabajo de detección de STEC RapidFinder, un método de PCR en tiempo real de dos etapas, se ha diseñado para detectar, identificar y confirmar con precisión E. coli O157:H7 y los 6 grandes serogrupos de E. coli no productora de toxina Shiga O157 definidos por el Servicio de Inspección y Seguridad Alimentaria del USDA (FSIS) como adulterantes en la industria de la carne de vacuno estadounidense.

Obtenga más información sobre el flujo de trabajo de detección de STEC RapidFinder >

*Swimley, Michelle S. Design and Evaluation of Two-Stage Multiplex Real-Time PCR Method for Detecting O157:H7 and non-O157 STEC Strains from Beef Samples. IAFP 2015.