La ficina inmovilizada Thermo Scientific Pierce consiste en una proteasa específica de sulfhidrilo (ficina) que se ha inmovilizado en resina de agarosa granulada para permitir la fragmentación controlada de anticuerpos, especialmente de IgG1 de ratón.

Características de la ficina inmovilizada Pierce:

• Puede generar fragmentos Fab y F(ab')2 a partir de IgG1 de ratón
• La reacción se puede controlar fácilmente
• Los fragmentos de anticuerpos no contienen productos de autodigestión
• La contaminación por ficina se elimina en fragmentos de anticuerpos

La ficina, que es similar a la papaína, es una proteasa sulfhidrilo inespecífica aislada del látex de higo. El peso molecular de la ficina es de aproximadamente 25.000 y es eficaz a pH 4 - 9,5 con un pH óptimo de 6,5. Cuando las moléculas IgG se incuban con ficina en presencia de cisteína, se dividen uno o más enlaces peptídicos en la región bisagra, produciendo fragmentos Fab o fragmentos F(ab’)2 El IgG1 de ratón es notablemente difícil de digerir en fragmentos funcionales de Fab o F(ab')2 utilizando papaína o pepsina, sin embargo, la producción y la inmunorreactividad son mejores cuando se digiere el IgG1 de ratón con ficina. La ficina inmovilizada está diseñada específicamente para la escisión de IgG1 de ratón en fragmentos de Fab o F(ab')2, y es una ventaja porque prácticamente elimina la autólisis, elimina la contaminación de una muestra con la proteasa y permite controlar la digestión mediante la extracción de la papaína o el control del flujo de la muestra sobre una columna de ficina inmovilizada.

La ficina inmovilizada es más estable que la enzima libre contra la desnaturalización inducida por calor, lo que resulta en un mantenimiento más prolongado de la actividad. El kit de preparación Fab y F(ab')2 contiene ficina inmovilizada, otros reactivos necesarios y un protocolo optimizado para la digestión de IgG1 de ratón. La ficina generará fragmentos IgG1 F(ab')2 y Fab de ratón en presencia de cisteína de 1 mM y de 10 mM, respectivamente. La generación de fragmentos a partir de otras especies e isotipos también es posible mediante la modificación de la concentración de cisteína y de otros parámetros de digestión.