Kit TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación, sin células competentes

Los kits TOPO® TA Cloning® para secuenciación proporcionan una reacción de clonación de gran eficacia en 5 minutos («clonación TOPO») para la inserción directa de productos PCR amplificados con polimerasa Taq en un vector plasmídico para secuenciación. Cada kit utiliza el vector pCR™ 4-TOPO® TA con sitios de primers de secuenciación especialmente diseñados que devuelven menos secuencia de vector y más secuencia de inserto en cada reacción, y están disponibles con una serie de células competentes, o sin ellas, dependiendo de sus necesidades y presupuesto. Estos kits incluyen las herramientas necesarias para clonar y seleccionar vectores recombinantes que contienen los fragmentos de PCR que elija.

• Obtenga más secuencia: permite obtener más secuencia de inserto y menos secuencia de vector cuando se utilizan los primers de secuenciación estándar
• Rápido y fácil: pase de PCR a clones en solo 3 pasos, entre los que se incluyen una reacción de clonación de 5 minutos
• Eficaz: obtenga hasta el 95 % de clones con el inserto adecuado
• Probado: rendimiento fiable durante más de una década con más de 20.000 citas

Vector TA pCR™4-TOPO: optimizado para secuenciación
El vector TA pCR™ 4-TOPO® ha minimizado el sitio de clonación múltiple y, por tanto, hay una menor distancia entre los sitios de primers de secuenciación y el sitio del inserto (tan solo 33 pb). Así, las reacciones de secuenciación producen menos secuencia de vector y más secuencia de inserto. El vector pCR™4-TOPO® TA tiene sitios para 4 primers de secuenciación comunes: M13 directo, M13 inverso, T7 y T3. Los kits incluyen una alícuota de cada uno.

Selección y manipulación de clones pCR™4-TOPO® TA
El vector pCR™4-TOPO® TA contiene marcadores de resistencia de ampicilina y kanamicina y la fusión de genes LacZα-ccdB para selección positiva y detección azul/blanco. El sitio de clonación múltiple minimizado del vector aún incluye sitios EcoRI de flanqueo para la escisión simplificada de productos de PCR clonados y un único sitio Sse8387I para la generación de eliminaciones anidadas antes de la secuenciación. Los promotores T7 y T3 están también presentes para la transcripción in vitro.

Clonación simplificada basada en TOPO®
Mediante la tecnología de clonación TOPO®, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar células competentes de E. coli.

Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones transportado al inserto deseado, podrá filtrar menos clones y ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR™4-TOPO® TA utilizado en este kit viene con salientes 3´T para la ligadura eficaz de productos de PCR amplificados con Taq, que contienen salientes 3´A.

El kit de clonación más ampliamente utilizado
En lo que se refiere a la clonación, la tecnología de clonación TOPO® ha sido un socio fiable para miles de científicos durante más de diez años. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO® se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.

Opciones de kits: Kits TOPO® TA Cloning® para secuenciación
Los kits TOPO® TA Cloning® para secuenciación pueden ser adquiridos con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades:
• Clonación general: TOP10 (n.º de cat. K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Clonación de alta eficiencia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K4580-01, K4580-40)
• Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: DH5α-T1R (n.º de cat. K4595-01, K4595-40)
• Crecimiento rápido: E. coli Mach1™-T1R químicamente competente (n.º de cat. K4530-20)
• Proporcione sus propias células (n.º cat. n.º 450071, 450030)

También ofrecemos una versión del kit que incluye un kit de minipreparación rápida de plásmidos PureLink® (n.º de cat. K4575-02) para utilizar en el aislamiento de un plásmido recombinante limpio y listo para secuenciación.