NHS-Fluoresceína (éster succinimidílico de 5/6-carboxifluoresceína), isómero mixto

La NHS-fluoresceína es un derivado del colorante de fluoresceína reactivo a la amina que se utiliza en una amplia variedad de aplicaciones, como el etiquetado de anticuerpos y otras sondas, para su uso en microscopia de fluorescencia, citometría de flujo y ensayos basados en inmunofluorescencia, como Western blotting y ELISA. Este éster NHS de fluoresceína etiqueta eficazmente los anticuerpos y otras proteínas purificadas en sus aminas primarias (cadenas laterales de lisina).

Propiedades de la NHS-Fluoresceína:

• Nombre alternativo: 5/6-FAM SE
• Nombre químico: 5/6-carboxifluoresceína éster succinidil
• Peso molecular: 473,4
• Fuente de excitación: Línea espectral de 488 nm, láser de ion-argón
• Longitud de onda de excitación: 494 nm
• Longitud de onda de emisión: 518 nm
• Coeficiente de extinción: > 70 000 M^-1cm^-1
• CAS n.º: 117548-22-8
• Pureza: > 90% por HPLC
• Solubilidad: Soluble en DMF o DMSO
• Grupos reactivos: El éster NHS, reacciona con aminas primarias a un pH de 7,0 a 9,0

La NHS-fluoresceína se activa con el grupo funcional N-hidroxi-succinidil-éster (éster NHS). En comparación con FITC, el derivado del éster de NHS tiene una mayor especificidad hacia las aminas primarias en presencia de otros nucleófilos y da como resultado una vinculación más estable tras el etiquetado. Los colorantes de fluoresceína reactiva a las aminas Pierce son mezclas de isómeros con grupos reactivos unidos en las posiciones 5- y 6- del anillo inferior. Las propiedades de estos isómeros son indistinguibles en términos de espectros de excitación y emisión, y para aplicaciones de proteínas no hay necesidad de aislar un isómero específico.

Aplicaciones
• Etiquetado de anticuerpos para su uso como sondas inmunofluorescentes
• Etiquetado de oligonucleótidos para sondas de hibridación
• Detección de proteínas en geles y en Western blots

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