Kit de aislamiento de proteínas de la superficie celular Pierce™

El kit de aislamiento de proteínas de superficie celular Thermo Scientific es un juego completo de reactivos para la biotinilación selectiva y posterior purificación de proteínas de superficie celular de mamíferos y la exclusión final de proteínas intracelulares.

Características del kit de aislamiento de proteínas de superficies celulares:

• Aísla las proteínas de la superficie celular: reduce la complejidad del total de proteína celular.
• Recupera eficazmente las proteínas etiquetadas: la biotina divisible permite la recuperación de casi el 100 % de las proteínas de la superficie celular aislada
• Práctico: todos los reactivos se suministran en un kit, junto con instrucciones completas para el etiquetado, la lisis celular y la purificación de proteínas de la membrana de la superficie celular
• Aplicaciones de Western blot: las proteínas recuperadas en el tampón SDS-PAGE se cargan directamente en geles de poliacrilamida
• Sistema sólido: protocolo diseñado para diversas líneas celulares, incluidas NIH 3T3, HeLa, C6 y A431.

El kit etiqueta de manera eficaz las proteínas que poseen residuos de lisina accesibles y suficiente exposición extracelular. El procedimiento de aislamiento utiliza un reactivo de biotinilación divisible que no permea las células (sulfo-NHS-SS-biotina) para etiquetar las aminas primarias expuestas de las proteínas en la superficie de células intactas adherente o de suspensión. Las células tratadas se recolectan y se lisan, y las proteínas con superficie etiquetada se purifican por afinidad mediante la resina de agarosa Thermo Scientific NeutrAvidin. Las proteínas de la superficie celular aisladas contienen una pequeña etiqueta no reactiva de las aminas primarias originalmente etiquetadas, pero ya no están biotiniladas (la biotina permanece unida a la resina). El kit contiene reactivos suficientes para ocho experimentos, cada uno con cuatro matraces T75 de células confluentes.

El kit de aislamiento de las proteínas de superficies celulares se ha utilizado con éxito para etiquetar y purificar proteínas de la superficie celular. En un experimento, se trató células HeLa con o sin sulfo-NHS-SS-biotina y las células se procesaron de acuerdo con el procedimiento del kit. Las fracciones recopiladas, incluido gel de flujo continuo, post elución y elución, se analizaron mediante Western blot. Se identificaron cuatro proteínas de la superficie celular en la fracción de elución de las células tratadas con la etiqueta de biotina. Estas proteínas incluyen las del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR por sus siglas en inglés), el factor de crecimiento semejante a la insulina-1 beta (IGF-1β), integrina 1 e integrina 5. En el contraste marcado, ninguna de estas proteínas se identificó en la fracción de elución de células sin etiquetar; las proteínas sin etiquetar se hallaban exclusivamente en el flujo continuo. Algunas proteínas de la superficie celular también se identificaron en las fracciones de flujo continuo a partir de células etiquetadas. Estas proteínas probablemente no fueron etiquetadas a causa del impedimento estérico. Una cantidad insignificante de proteínas capturadas estaba presente en las fracciones de gel post elución, lo que supone una recuperación de casi el 100 % de las proteínas capturadas. Se ha detectado una cantidad mínima de proteínas de choque térmico 90 (Hsp90) en la fracción de elución de todas las muestras analizadas, lo que demuestra la especificidad de la etiqueta de superficie celular con respecto a las proteínas intracelulares.

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