Pierce™ SDS-PAGE Sample Prep Kit

El kit de preparación de muestras Thermo Scientific Pierce SDS-PAGE elimina rápida y fácilmente altos niveles de sales, desnaturalizantes, detergentes y otros componentes del tampón que interfieren con la electroforesis en gel de poliacrilamida de proteínas.

Características del kit de preparación de muestras SDS-PAGE:

• Elimina los artefactos de gel causados por contaminantes incompatibles: elimina colorantes, agentes reductores, detergentes, azúcares, glicerol, guanidina, urea y sulfato de amonio para proporcionar resultados reproducibles mediante el análisis SDS-PAGE
• Compatible con el ensayo de proteína BCA: permite la cuantificación de proteínas de la muestra procesada antes de la carga del gel
• Enriquece las soluciones de proteínas diluidas: concentra las muestras de proteínas para el análisis SDS-PAGE seis veces en menos de 20 minutos
• Potente y flexible: procesamiento de 2 l a 350 µl de muestra que contiene hasta 70 µg de proteína; recupere del 75 % al 85 % de la proteína total en 50 µl de tampón de elución
• Kit completo y práctico: incluye resina PAGEprep, DMSO, cubetas de centrifugado y tampón de carga de muestras

El kit de preparación de muestras SDS-PAGE proporciona un método sencillo y eficaz para concentrar las muestras y eliminar los productos químicos que interfieren con el análisis SDS-PAGE, como ácidos y bases, detergentes, guanidina y sulfato de amonio. El PAGE-prep Resin patentado une la proteína en presencia de dimetilsulfóxido (DMSO). Posteriormente, los contaminantes interferentes se eliminan lavando la resina unida a las proteínas en un formato de centrifugación fácil de usar. Las proteínas se eluyen en un tampón compatible con el ensayo de proteínas Pierce BCA, lo que permite la cuantificación de una porción de la muestra procesada. Las proteínas eluidas se pueden combinar con tampón de muestra y analizar en el sistema SDS-PAGE de su elección.

Incluye:
• Pasta de resina PAGEprep, solución DMSO, tampón de elución, tampón de muestra, cubetas de centrifugado y tubos de recogida

Aplicaciones:
• Cuerpos de inclusión solubilizados en muestras de guanidina· HCl
• Muestras que contienen tampones de pH bajo, tiocianatos o urea
• Proteínas precipitadas en sulfato de amonio
• Concentración de soluciones de proteínas diluidas

El kit de preparación de muestras SDS-PAGE utiliza una resina única compuesta de tierra de diatomeas modificada que se une a la proteína en presencia de DMSO. El protocolo simple implica combinar de 2 l a 350 µl de muestra, que contiene hasta 70 µg de proteína, con 20 µl de resina PAGEprep en DMSO (suministrado). Las proteínas de la muestra se unen a la resina en tres a cinco minutos, después de lo cual se lavan los productos químicos contaminantes no unidos. Finalmente, las proteínas purificadas se recuperan de la resina en 50 µl de tampón de elución. Posteriormente, la muestra de proteína recuperada está lista para mezclarse con el tampón de carga de muestras 5X suministrado para la carga del gel (u otro tampón de carga de muestras). El procedimiento también permite que las muestras de proteínas diluidas se concentren hasta seis veces, lo que permite cargar más proteínas por pocillo. Además, el ensayo de proteínas BCA Thermo Scientific Pierce (referencia 23225) es compatible con el tampón de elución y se puede utilizar para determinar la concentración de proteínas final antes de la carga del gel.

Para un análisis fiable de SDS-PAGE, las muestras de proteínas deben prepararse en un tampón sin sustancias interferentes y a concentraciones de proteínas adecuadas para el análisis. Muchas sustancias interferentes, que interfieren con los tampones de muestra típicos para la electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), son difíciles de eliminar mediante los métodos tradicionales de preparación de muestras. Por ejemplo, las muestras de proteínas que contengan guanidina-HCl 6 M se precipitarán cuando se mezclen con el tampón Laemmli para SDS-PAGE, haciendo que la muestra no funcione bien en un gel. Afortunadamente, las muestras que contienen una amplia gama de productos químicos interferentes, como agentes caotrópicos, detergentes, lípidos, pH extremos y sales, se pueden limpiar en cuestión de minutos con el kit de preparación de muestras SDS-PAGE.

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