Pierce™ Protein A Chromatography Cartridges

Los cartuchos de cromatografía de proteína A Thermo Scientific™ Pierce™ son dispositivos preenvasados prácticos y listos para su uso para el aislamiento y la purificación de anticuerpos policlonales y monoclonales. Estos cartuchos son eficaces para la purificación rutinaria por afinidad de IgG policlonales y monoclonales a partir de suero, ascitis y sobrenadante de cultivos celulares.

La proteína A Plus agarosa Pierce es una proteína A nativa purificada inmovilizada covalentemente a alta densidad en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de gran calidad (CL-6B). De entre las distintas variedades disponibles de proteína A inmovilizada en resinas de afinidad, esta proporciona la combinación más versátil de características cromatográficas para una alta producción y una óptima purificación de todas las IgG procedentes de muestras de suero de mamíferos. Los gránulos de agarosa tienen propiedades fisicoquímicas idóneas para muchos sistemas de purificación por afinidad.

Características de la Proteína A Plus agarosa Pierce:

• Proteína A nativa: la proteína A inmovilizada es idónea para la purificación de la IgG policlonal a partir de suero humano, de conejo, de cerdo, de perro o de gato.
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B), la resina más utilizada en métodos de purificación de proteínas por afinidad.
• Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína A mediante enlaces covalentes resistentes a la lixiviación y sin carga, lo que produce una unión no específica y posibilita que se use varias veces sin que afecte al rendimiento.
• Alta capacidad: la variedad «Plus» de la proteína A agarosa Pierce tiene una carga densa de proteína A inmovilizada, lo que proporciona una capacidad de unión superior a 34 mg de IgG de humano por ml de resina (aproximadamente entre 16 y 17 mg de IgG de ratón por ml de resina).

Los cartuchos Pierce son compatibles con los principales sistemas automatizados de cromatografía de líquidos o para el procesamiento manual con jeringa, y se acoplan directamente a los sistemas ÄKTA™ o FPLC sin conectores adicionales. Con cada producto se incluye un paquete accesorio que se ajusta con facilidad a los cartuchos con racores de jeringa Luer-Lok o tubos de 0,0625 pulgadas. Los cartuchos de proteína A proporcionan separaciones cromatográficas rápidas, sencillas y reproducibles, y se pueden regenerar para múltiples usos.

La proteína A es un componente de la pared celular producido por varias cepas de Staphylococcus aureus. La proteína de 46,7 kDa consta de una única cadena polipeptídica que no contiene hidratos de carbono. La proteína A nativa tiene cuatro puntos de unión de gran afinidad (Ka = 10^8/mol) capaces de interactuar con la región Fc de los anticuerpos de la clase IgG de determinadas especies de mamíferos. La función de unión a IgG es óptima a un pH de 8,2; no obstante, también se produce una unión eficaz en tampones neutros y fisiológicos (pH de 7,0 a 7,6).

La proteína A es una proteína derivada de una bacteria que se une con alta afinidad y especificidad a la porción Fc de los anticuerpos, especialmente a los de la clase IgG. En comparación con la proteína G (la alternativa a la proteína A), la proteína A tiene la mayor capacidad de unión a las subclases de IgG de conejos, cerdos, perros y gatos. La proteína A tiene también una mayor capacidad de unión con la IgG humana, con la excepción de IgG3, con la que se une de forma débil. La proteína A se une débilmente a la IgG1 de ratón y no se recomienda para la mayoría de aplicaciones con ese isotipo de anticuerpo.

La proteína A Plus agarosa Pierce se prepara con el procedimiento químico de acoplamiento Thermo Scientific AminoLink, que ofrece varias ventajas en comparación con los métodos tradicionales de inmovilización de ligandos. La inmovilización AminoLink da como resultado la conjugación entre los monómeros de azúcar de los gránulos de agarosa y los restos de lisina nativa de la proteína A mediante enlaces amida simples. A diferencia de la inmovilización habitual con bromuro de cianógeno (CNBr), el método AminoLink, que no introduce ningún grupo químico nuevo que pudiera causar uniones inespecíficas no deseadas, produce una unión estable y fundamentalmente irreversible. De esta forma, se obtiene una resina de gran capacidad de unión que mantiene la proteína A inmovilizada funcional después de varias series de purificación de anticuerpos.

Propiedades del gránulo entrecruzado al 6 %