PichiaPink™ Secreted Protein Kit
Product Image
Invitrogen™

PichiaPink™ Secreted Protein Kit

El kit de expresión secretada de proteínas PichiaPink™ es un nuevo sistema de expresión de proteínas recombinante basado en laMás información
Have Questions?
Número de catálogoCantidad
A111511 kit
Número de catálogo A11151
Precio (CLP)
4.702.869
Each
Añadir al carro de la compra
Cantidad:
1 kit
Precio (CLP)
4.702.869
Each
Añadir al carro de la compra
El kit de expresión secretada de proteínas PichiaPink™ es un nuevo sistema de expresión de proteínas recombinante basado en la levadura Pichia pastoris. El kit de expresión secretada de proteínas PichiaPink™ ofrece una bioproducción práctica y rentable desde el matraz de agitación hasta la producción de 1000 litros de su proteína recombinante. El kit de expresión secretada de proteínas PichiaPink™ se suministra con nuestras nuevas cepas Pichia, los vectores pPINK-HC y pPINK-LC y las secuencias de señales de secreción para la producción de su proteína.
•   Comience con la producción de proteínas secretadas en Pichia pastoris.
•   Detecte sus transformantes Pichia rápidamente por selección auxotrófica y por colores.
•   Reduzca la degradación de las proteínas con cepas Pichia pastoris c deficientes en proteasas.

El kit de expresión secretada de proteínas PichiaPink™ incluye:
•   El kit de vector de proteína secretada PichiaPink™ (N.º cat. A11153)
•   conjunto de la cepa de expresión PichiaPink ™ (N.º cat. A11154)
•   Kit de medios PichiaPink™ (N.º cat. A11156)

Una nueva forma de detectar los transformantes Pichia
El kit de optimización de la secreción PichiaPink™ utiliza la adenina auxotrófica para seleccionar los transformantes Pichia. Las cepas de PichiaPink™ tienen el genotipo ade2 y requieren la complementación con el gen ADE2 para crecer sin adenina. El uso de un marcador auxotrófico también facilita el mantenimiento de los transformantes. No se requieren antibióticos para mantener sus transformantes.

Además, puede realizar la detección de los transformantes de Pichia por color. Las cepas PichiaPink™ no transformadas aparecen como colonias rosadas, mientras que las cepas PichiaPink™ transformadas aparecen como colonias blancas (Figura 1).

Secreta tus proteínas con el vector pPINKα-HC
El kit de expresión de proteínas secretadas PichiaPink™ viene con el vector pPINKα-HC. El vector pPINKα-HC tiene incorporada la secuencia de señal del factor de α-inserción y permite que su proteína sea secretada en el medio. Secretando su proteína en los medios hace la cosecha y purificación de su proteína más fácil. El vector pPINKα-HC está construido alrededor del gen ADE2 para complementar las cepas las cepas Pichia con ade2 deficiente. Este vector utiliza el promotor AOX1 inducido por metanol para expresar su proteína. Además, el vector pPINKα-HC está diseñado para ser integrado en un número de copia alto en sus transformantes de Pichia.

El kit de vector de proteína secretada PichiaPink™ (N.º cat. A11153) puede solicitarse por separado para rellenar el kit de expresión de proteína secretada PichiaPink™.

Mantenga sus proteínas intactas
El kit de expresión de proteína secretada PichiaPink™ se suministra con el conjunto de cepas de expresión PichiaPink™. Este conjunto contiene las 4 cepas Pichia pastoris para su uso con el sistema de expresión de levadura PichiaPink™. Las cuatro cepas tienen el genotipo ade2. Además, 3 cepas incluyen deactivaciones génicas en 2 genes de proteasa. Las cepas con deficiencia de proteasa reducen la necesidad de inhibidores de proteasa al cultivar sus células y mejoran el rendimiento de su proteína. Pruebe una desactivación génica individual de proteasa o la desactivación génica doble de proteasa para identificar el más adecuado para usted.

Puede solicitar el conjunto de cepa de expresión PichiaPink™ (N.º cat. A11154) por separado para rellenar el kit de expresión de proteína secretada PichiaPink™.

Sobres de medios para empezar
El kit de medios PichiaPink™ es un juego de prácticos estuches de medios preempaquetados para su uso con el sistema de expresión PichiaPink™. El kit de medios PichiaPink™ contiene los medios necesarios para cultivar cepas de PichiaPink™ a partir de material congelado para obtener cultivos listos para su transformación y selección. Puede solicitar el kit de medios PichiaPink™ (N.º cat. A11156) por separado para rellenar el kit de expresión secretada PichiaPink™.

¿Por qué elegir el sistema de expresión de levadura PichiaPink™?
El sistema de expresión de levadura PichiaPink™ está basado en la levadura Pichia pastoris. Entre las ventajas de la Pichia pastoris se incluyen un rápido crecimiento, antecedentes genéticos bien definidos, una formulación de medios sencilla y un fácil manejo. Durante más de 30 años, la Pichia pastoris se ha utilizado en laboratorios de todo el mundo para producir cientos de proteínas diferentes de muchas especies, incluida la humana (referencias 1 y 2). El sistema de expresión de levadura PichiaPink™ permite producir proteínas de forma práctica y rentable desde pequeñas a grandes escalas.

Para obtener información sobre cómo obtener una licencia de uso comercial para el sistema de expresión de levadura PichiaPink™, consulte la disponibilidad en outlicensing@lifetech.com.

Para uso exclusivo en investigación. No está indicado para uso terapéutico ni diagnóstico animal o humano.

Enlaces relacionados
• Obtenga más información sobre el sistema de expresión de levaduras PichiaPink™.
• Obtenga más información sobre nuestros sistemas de expresión de proteínas.

Referencias

1. Cereghino JL, Cregg JM. Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. 2002 Aug; 13 (4): 329-32. [PubMed]
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Células compatiblesCepas Pichia pastoris
Mecanismo de expresiónExpresión basada en células
Estabilidad de expresiónEstable
Tipo de producto finalMedio líquido, placas de agar
Línea de productosPichiaPink
Cantidad1 kit
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
EspecieP. pastoris
Sistema de expresiónLevadura
TipoKit de proteínas secretadas
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El kit de expresión de proteína secretada PichiaPink™ consta de:
• El kit de vectores de proteína secretada PichiaPink™ que contiene el plásmido de alto número de copias con la presecuencia del factor de apareamiento alfa S. cerevisiae para producir expresión de proteína secretada.
• El conjunto de cepas de expresión PichiaPink™ contiene 4 cepas de glicerol
• El kit de medios PichiaPink™ contiene 4 medios básicos.

Preguntas frecuentes

When selecting for blasticidin-resistant transformants in the X-33 strain using pPIC6/pPIC6α vectors, why do I get large and small colonies on YPD plates containing 300 µg/ml blasticidin?

Generally, large colonies represent transformants containing pPIC6/pPIC6α integrants, while small colonies represent transformants containing pPIC6/pPIC6α non-integrants. These non-integrants have transduced the pPIC6/pPIC6α plasmid, and therefore, exhibit a low level of blasticidin resistance in the initial selection process. Upon subsequent screening, these non-integrant transformants do not retain blasticidin resistance.

When choosing a blasticidin-resistant transformant for your expression studies, we recommend that you pick blasticidin-resistant colonies from the initial transformation plate and streak them on a second YPD plate containing the appropriate concentration of blasticidin. Select transformants that remain blasticidin-resistant for further studies.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

My transformation is not working. Do you have any suggestions?

Here are some suggestinos:

- Make sure that you have harvested cells during log-phase growth (OD <1.0 generally).
- If electroporation is being used, see the electroporator manual for suggested conditions. Vary electroporation parameters if necessary.
- Use more DNA.
- Use freshly made competent cells.
- If the LiCl transformation method is being used, try boiling the carrier DNA.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

My spheroplasting of Pichia worked twice, but hasn't worked since. The OD of the culture simply does not drop.

Here are some things to consider:

- If the OD of cells that are used is too high, they will not spheroplast. Do not overgrow cells.
- Do not use old cells and make sure that they are in log phase of growth.
- Make sure to mix zymolyase well before using. Zymolyase is more of a suspension than a solution.
- Make the PEG solution fresh each time and check the pH.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

Is there a recommended protocol for fermentation using constitutive expression vectors such as pGAPZ?

Use the following high cell density protocol for pGAP clones. Feed carbon until the desired density is reached (300 to 400 g/L wet cell weight (WCW)). If the protein is well-behaved in the fermenter, increase to 300-400 g/L WCW as with methanol inducible clones. These densities can be reached in less than 48 hours of fermentation. We have fermented constitutive expressers on glycerol using these protocols with good results. Some modifications to the Fermentation Basal Salts Medium that you might want to make are:

1) Substitute 2% dextrose for the 4% glycerol in the batch medium.
2) Substitute 40% dextrose for the 50% glycerol in the fed-batch medium.
3) Feed the 40% dextrose at 12 mL/L/hr (Jim Cregg has published data on expression using several carbon sources as substrates; dextrose gave the highest levels of expression).
4) Yeast extract and peptone may be added to the medium for protein stability.

One warning: If you are working with His- strains, they remain His- after transformation with pGAPZ. Fermentation in minimal medium will require addition of histidine to the fermenter.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

Can the methanol and ammonium hydroxide solutions used to prepare Pichia fermentation medium be autoclaved?

No, you cannot autoclave methanol. There are two approaches to this, depending a bit on the size of the bioreactor and the volumes involved. You can either dilute to working concentration and filter-sterilize with a filter suitable for alcohols, or you can just assume that methanol is sterile (it should be) and dilute into sterile water. For the ammonium hydroxide solution, you should also not autoclave it. You can assume the 30% stock solution is sterile (nothing should live in this solution) and dilute into sterile water to the working concentration.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

View all PichiaPink™ Secreted Protein Kit FAQs