Conjunto de cepas de expresión ™PichiaPink
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Conjunto de cepas de expresión ™PichiaPink

El PichiaPink™ Expression Strain Set contiene las 4 cepas Pichia pastoris para su uso con los kits del sistema deMás información
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Número de catálogoCantidad
A111544 x 1 mL
Número de catálogo A11154
Precio (CLP)
2.371.087
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Cantidad:
4 x 1 mL
Precio (CLP)
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El PichiaPink™ Expression Strain Set contiene las 4 cepas Pichia pastoris para su uso con los kits del sistema de expresión PichiaPink™. Cada cepa viene en forma de cepa congelada en medios YPD con glicerol al 15 %. Todas las cepas PichiaPink™ tienen la eliminación del gen ade2. 3 cepas tienen eliminaciones de dos genes de proteasa, PEP4 y PRB1. Puede utilizar el PichiaPink™ Expression Strain Set para rellenar los kits del sistema de expresión de levaduras PichiaPink™.

El PichiaPink™ Expression Strain Set incluye las siguientes cepas Pichia:
•     PichiaPink™ Cepa 1: ade2
•     PichiaPink™ Cepa 2: ade2, pep4
•     PichiaPink™ Cepa 3: ade2, prb1
•     PichiaPink™ Cepa 4: ade2, prb1, pep4

Seleccione transformantes por color
El sistema de expresión de levaduras PichiaPink™ facilita la selección de colonias transformadas por color. Las cepas PichiaPink™ no transformadas forman colonias rosas. Cuando se cultiva en placas sin adenina, las cepas transformadas PichiaPink™ forman colonias blancas (Fig. 1).

Reduzca la degradación de proteínas
El PichiaPink™ Expression Strain Set incluye 3 cepas con knockouts en dos genes de proteasa. Las cepas con deficiencia de proteasa reducen la necesidad de inhibidores de proteasa al cultivar sus células y mejoran el rendimiento de su proteína. Pruebe un solo knockout de proteasa o el doble de knockout de proteasa hasta encontrar el que mejor funcione para su caso.

¿Por qué elegir el sistema de expresión de levaduras PichiaPink™?
El sistema de expresión de levaduras PichiaPink™ se basa en la levadura Pichia pastoris. Las ventajas de Pichia pastoris incluyen un crecimiento rápido, antecedentes genéticos bien definidos, una formulación de medios sencilla y una manipulación fácil. Durante más de 30 años, Pichia pastoris se ha utilizado en laboratorios de todo el mundo para producir cientos de proteínas diferentes de muchas especies, incluso humana (Ref 1, 2). El sistema de expresión de levaduras PichiaPink™ permite una producción de proteínas fácil y rentable a pequeña y gran escala.

Para obtener información sobre cómo obtener una licencia de uso comercial para el sistema de expresión de levaduras PichiaPink™, diríjase a outlicensing@lifetech.com.

Para uso exclusivo en investigación. No está indicado para uso terapéutico ni diagnóstico animal o humano.

Enlaces relacionados
• Obtenga más información sobre el sistema de expresión de levaduras PichiaPink™.
• Obtenga más información sobre nuestros otros sistemas de expresión de proteínas.

Referencias

1. Cereghino JL, Cregg JM. Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. 2002 Aug;13(4):329-32. [PubMed]
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Cepa bacteriana o de levaduraPichiaPink™
Para utilizar con (aplicación)Yeast Expression
FormatoTubo
Compatibilidad de alto rendimientoCompatible con alto rendimiento
Tipo de productoConjunto de cepas de expresión
Cantidad4 x 1 mL
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
EspecieP. pastoris
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El PichiaPink™ Expression Strain Set consta de cuatro cepas de glicerol (1 ml cada una). Las cuatro cepas son mutantes de proteasa excepto la cepa 1.
•PichiaPink™ Cepa 1 (ade2)
•PichiaPink™ Cepa 2 (ade2, pep4)
•PichiaPink™ Cepa 3 (ade2, prb1)
•PichiaPink™ Cepa 4 (ade2, prb1, pep4)

Almacenar las cepas de glicerol a -80 °C

Preguntas frecuentes

When selecting for blasticidin-resistant transformants in the X-33 strain using pPIC6/pPIC6α vectors, why do I get large and small colonies on YPD plates containing 300 µg/ml blasticidin?

Generally, large colonies represent transformants containing pPIC6/pPIC6α integrants, while small colonies represent transformants containing pPIC6/pPIC6α non-integrants. These non-integrants have transduced the pPIC6/pPIC6α plasmid, and therefore, exhibit a low level of blasticidin resistance in the initial selection process. Upon subsequent screening, these non-integrant transformants do not retain blasticidin resistance.

When choosing a blasticidin-resistant transformant for your expression studies, we recommend that you pick blasticidin-resistant colonies from the initial transformation plate and streak them on a second YPD plate containing the appropriate concentration of blasticidin. Select transformants that remain blasticidin-resistant for further studies.

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My transformation is not working. Do you have any suggestions?

Here are some suggestinos:

- Make sure that you have harvested cells during log-phase growth (OD <1.0 generally).
- If electroporation is being used, see the electroporator manual for suggested conditions. Vary electroporation parameters if necessary.
- Use more DNA.
- Use freshly made competent cells.
- If the LiCl transformation method is being used, try boiling the carrier DNA.

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My spheroplasting of Pichia worked twice, but hasn't worked since. The OD of the culture simply does not drop.

Here are some things to consider:

- If the OD of cells that are used is too high, they will not spheroplast. Do not overgrow cells.
- Do not use old cells and make sure that they are in log phase of growth.
- Make sure to mix zymolyase well before using. Zymolyase is more of a suspension than a solution.
- Make the PEG solution fresh each time and check the pH.

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Is there a recommended protocol for fermentation using constitutive expression vectors such as pGAPZ?

Use the following high cell density protocol for pGAP clones. Feed carbon until the desired density is reached (300 to 400 g/L wet cell weight (WCW)). If the protein is well-behaved in the fermenter, increase to 300-400 g/L WCW as with methanol inducible clones. These densities can be reached in less than 48 hours of fermentation. We have fermented constitutive expressers on glycerol using these protocols with good results. Some modifications to the Fermentation Basal Salts Medium that you might want to make are:

1) Substitute 2% dextrose for the 4% glycerol in the batch medium.
2) Substitute 40% dextrose for the 50% glycerol in the fed-batch medium.
3) Feed the 40% dextrose at 12 mL/L/hr (Jim Cregg has published data on expression using several carbon sources as substrates; dextrose gave the highest levels of expression).
4) Yeast extract and peptone may be added to the medium for protein stability.

One warning: If you are working with His- strains, they remain His- after transformation with pGAPZ. Fermentation in minimal medium will require addition of histidine to the fermenter.

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Can the methanol and ammonium hydroxide solutions used to prepare Pichia fermentation medium be autoclaved?

No, you cannot autoclave methanol. There are two approaches to this, depending a bit on the size of the bioreactor and the volumes involved. You can either dilute to working concentration and filter-sterilize with a filter suitable for alcohols, or you can just assume that methanol is sterile (it should be) and dilute into sterile water. For the ammonium hydroxide solution, you should also not autoclave it. You can assume the 30% stock solution is sterile (nothing should live in this solution) and dilute into sterile water to the working concentration.

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