CloneMiner™ II cDNA Library Construction Kit

El kit de construcción de bibliotecas de ADNc CloneMiner™ II es un kit de segunda generación CloneMiner™ que permite laMás información

Número de catálogo	Cantidad
A11180	1 kit

Número de catálogo A11180

Precio (CLP)

3.475.251

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Cantidad:

1 kit

Precio (CLP)

3.475.251

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El kit de construcción de bibliotecas de ADNc CloneMiner™ II es un kit de segunda generación CloneMiner™ que permite la construcción rápida de bibliotecas de ADNc altamente representativas sin la clonación de enzimas de restricción. Esta innovadora tecnología de construcción de bibliotecas combina la transcriptasa inversa SuperScript™ III con la tecnología de clonación Gateway™, resultando en el descubrimiento de clones de longitud completa que antes no se podían obtener. El kit también evita el uso de reacciones de ligación que consumen mucho tiempo y son ineficientes, haciendo que la construcción de la biblioteca sea más rápida y ofreciendo una mejor representación.

El kit de construcción de bibliotecas de ADNc CloneMiner™ II garantiza:
• Títulos primarios elevados
• Insertos de un tamaño grande de media
• Porcentaje más alto de genes de longitud completa
• Clonación altamente eficiente de ADNc a múltiples vectores de destino sin necesidad de restricción de digestión enzimática ni ligación

Cómo funciona el kit CloneMiner™ II:

• Alta producción de ADNc de longitud completa: El kit CloneMiner™ II contiene SuperScript™ III para generar altas producciones de ADNc. La transcriptasa inversa SuperScript™ III (RT), mutante exclusiva de SuperScript™ II RT es activa a 50 °C y tiene una vida media de 220 minutos. También tiene una mutación puntual que reduce la actividad de la ARNasa H, disminuyendo la degradación del ARN durante la síntesis de la primera cadena y aumentando el porcentaje de genes de longitud completa.

• La tecnología de clonación Gateway™ evita la clonación de enzimas de restricción: La construcción de la biblioteca está mediada por tecnología Gateway™, un sistema de recombinación del punto específico que elimina el uso de enzimas de restricción y ligasas en la clonación. Cada inserto de ADNc está flanqueado por puntos de recombinación att específicos (añadidos durante los pasos de síntesis de ADNc) que se recombinan con puntos de att complementarios presentes en vectores de donantes Gateway™ para crear clones de entrada. Los clones de entrada se vuelven a combinar posteriormente con vectores de expresión Gateway™ para crear clones de expresión, reemplazando eficazmente el uso de enzimas de restricción y ligasa. Los clones resultantes mantienen la orientación y el marco de lectura originales permitiendo el análisis funcional de genes de longitud completa y bibliotecas completas.

¿En qué se diferencia este kit del kit CloneMiner™ original?
• El nuevo kit incorpora un protocolo simplificado.
• Para asegurar una alta producción de ADNc, la transcriptasa inversa SuperScript™ II (RT) se ha reemplazado por la transcriptasa inversa SuperScript™ III.
• Para permitir la configuración de la reacción con menos pasos de pipeteo, la mezcla de enzimas Gateway™ BP Clonase™ se ha reemplazado por la mezcla de enzimas Gateway™ BP Clonase™ II, que contiene enzimas y tampón en una sola mezcla.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Cepa bacteriana o de levaduraDH10B

Método de clonaciónPuerta de enlace

Tipo de producto finalBiblioteca de ADNc

Para utilizar con (aplicación)Bibliotecas de ADNc y construcción de bibliotecas

Línea de productosCloneMiner

Tipo de productoKit de preparación de bibliotecas

Cantidad1 kit

Transcriptasa inversaSuperScript™ III

VectorpDONR222

FormatoKit

Unit SizeEach

Contenido y almacenamiento

El Kit CloneMiner™ II incluye SuperScript™ III RT, vectores Gateway™, reactivos para la construcción de bibliotecas de ADNc y células competentes resistentes a los fajes T1 ElectroMax™ DH10B™. Consulte el manual para obtener más información. Almacene las células competentes resistentes a fago T1 ElectroMax™ DH10B™ a – 80 °C, las columnas de fraccionamiento de tamaño ADNc a + 4 °C, todos los demás componentes del kit a – 20 °C.

Preguntas frecuentes

Do you still offer the SuperScript Full length cDNA Library Construction Kit?

The SuperScript Full length cDNA Library Construction Kit has been discontinued. The alternative is the CloneMiner II cDNA Library Construction Kit, Cat. No. A11180.

What are the benefits of using the Gateway system in your CloneMiner II cDNA Library Construction Kit?

Gateway entry clone cDNA libraries are ready to transfer into suitable destination vectors for gene expression. You do not have to worry about restriction enzyme digestion of cDNA (which can decrease the insert size,) or vector prior to cloning.

What kit would you recommend for making cDNA libraries?

We would recommend using the CloneMiner cDNA Library Construction Kit (Cat. No. A11180) for construction of high-quality Gateway cloning-compatible cDNA libraries without the use of restriction enzyme cloning. This system uses highly efficient recombinational cloning, resulting in a higher number of primary clones compared to standard cDNA library construction methods.

How large of a PCR product can I recombine with a pDONR vector via BP cloning? Does the same apply for TOPO-adapted Entry vectors?

There is no theoretical limit to insert size for a BP reaction with a pDONR vector. Maximum size tested in-house is 12 kb. TOPO vectors are more sensitive to insert size and 3-5 kb is the upper limit for decent cloning efficiency.

How should I clean up my attB-PCR product?

After generating your attB-PCR product, we recommend purifying it to remove PCR buffer, unincorporated dNTPs, attB primers, and any attB primer-dimers. Primers and primer-dimers can recombine efficiently with the Donor vector in the BP reaction and may increase background after transformation into E. coli, whereas leftover PCR buffer may inhibit the BP reaction. Standard PCR product purification protocols using phenol/chloroform extraction followed by ammonium acetate and ethanol or isopropanol precipitation are not recommended for purification of the attB-PCR product as these protocols generally have exclusion limits of less than 100 bp and do not efficiently remove large primer-dimer products. We recommend a PEG purification protocol (see page 17 of the Gateway Technology with Clonase II manual). If you use the above protocol and your attB-PCR product is still not suitably purified, you may further gel-purify the product. We recommend using the PureLink Quick Gel Extraction kit.

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