GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis PLUS System

El sistema de mutagénesis dirigida GeneArt™ PLUS lleva la tecnología de mutagénesis al siguiente nivel con la capacidad de realizar mutaciones en una o varias ubicaciones en plásmidos de mayor tamaño con más eficacia y en menos tiempo que la competencia.

• Potente: realice sustituciones, eliminaciones o inserciones de hasta 3 nucleótidos en 1, 2 o 3 ubicaciones separadas en plásmidos de ADN de hasta 14 kb
• Flexible: realice mutagénesis en varias ubicaciones con nucleótidos degenerados y mutaciones de una sola ubicación de hasta 25 nucleótidos de largo o 12 nucleótidos de largo con nucleótidos degenerados
• Eficaz: obtenga los mutantes deseados la primera vez; más del 90 % de mutantes correctos en un plásmido de 10 Kb
• Rápido: obtenga su ADN plasmídico mutado en menos de tres horas con un protocolo sencillo de manipulación mínima
• Versátil: use plásmidos de muchos tamaños y ADN aislado de cualquier fuente, sin necesidad de vectores especializados, cepas huésped o sitios de restricción

Protocolo de mutagénesis optimizado
El sistema de mutagénesis dirigida GeneArt™ se ha optimizado para una mayor eficiencia y capacidad para varias ubicaciones, lo que ha dado como resultado el kit «PLUS». Como en la primera generación de sistemas de mutagénesis dirigida GeneArt™, los pasos de metilación y amplificación del ADN se combinan en una única reacción, sin necesidad de un paso de digestión DpnI in vitro. Tras la metilación y la amplificación, una reacción de recombinación in vitro de 15 minutos de los productos PCR amplificados aumenta la colonia resultante entre 3 y 10 veces, lo que da lugar a una mayor eficacia de mutagénesis. Una última transformación del ADN mutado en células de E.coli DH5α™ digiere cualquier ADN parental metilado, que deja solo el producto de reacción de mutagénesis no metilado. No son necesarios pasos de purificación ni digestiones adicionales. Las colonias individuales se pueden seleccionar al día siguiente para verificar las mutaciones.

Creación sencilla de los mutantes deseados
La creación de mutantes con el sistema de mutagénesis dirigida GeneArt™ PLUS se basa en las propiedades inherentes de la ADN metilasa, la ADN polimerasa de alta fidelidad, las enzimas de recombinación y la endonucleasa nativa McrBC de E. coli. Solo tiene que incorporar la o las mutaciones que desee en el primer con nuestra herramienta de diseño GeneArt™ para realizar una mutagénesis y un ensamble óptimos (consulte «Soporte de diseño en sílice» a continuación). Combine los primers de vector y mutagénesis y después de la PCR, la recombinación y la transformación tendrá vectores con las mutaciones deseadas y más del 90 % de eficiencia.

Soporte de diseño en sílice
Un paso clave en la mutagénesis dirigida GeneArt™ es el diseño correcto de primers con la homología apropiada y el espaciamiento para ayudar a asegurar la mutagénesis exitosa de su plásmido. Para simplificar y acelerar el proceso de diseño, proporcionamos una herramienta en línea gratuita, la herramienta de diseño GeneArt™ para montaje y mutagénesis fluidos o de alto grado, para ayudarle a diseñar su experimento «in silico». La herramienta le permite revisar su secuencia de plásmidos, diseña oligonucleótidos de ADN para la introducción de las mutaciones deseadas, ofrece una secuencia de aminoácido actualizada de su gen mutado, muestra una representación gráfica de la nueva construcción y permite la descarga de una secuencia anotada en formato GenBank compatible con el software Vector NTI™.

Solo para uso en investigación. No diseñado para uso diagnóstico o terapéutico en humanos ni en animales.