Alexa Fluor™ 647 es un tinte de rojo lejano brillante y fotoestable con una excitación adaptada idealmente para la línea de láser de 633 nm. El tinte Alexa Fluor™ 647, empleado para la generación estable de señales para la obtención de imágenes en citometría de flujo, es soluble en agua e insensible al pH entre pH 4 y pH 10. La fluorescencia de este tinte Alexa Fluor™ de larga longitud de onda no es visible al ojo humano, pero se detecta fácilmente con la mayoría de los sistemas de adquisición de imágenes. Además de las formulaciones de colorante reactivo, ofrecemos el colorante Alexa Fluor™ 647 conjugado con una serie de anticuerpos, péptidos, proteínas, trazadores y sustratos de amplificación optimizados para la detección y el etiquetado celular (más información).

El éster de NHS (o éster de succinimidilo) de Alexa Fluor™ 647 es la herramienta más empleada para conjugar este colorante con una proteína o anticuerpo. Los ésteres NHS se pueden usar para etiquetar aminas primarias (R-NH₂) de proteínas, oligonucleótidos modificados por aminas y otras moléculas que contengan aminas. El conjugado Alexa Fluor™ obtenido mostrará una fluorescencia más brillante y mayor fotoestabilidad que los conjugados de otros fluoróforos espectralmente similares.

Información detallada sobre este éster de NHS AlexaFluor™:

Etiqueta de fluoróforo: Tinte Alexa Fluor™ 647
Grupo reactivo: Éster NHS
Reactividad: Aminas primarias en proteínas y ligandos, oligonucleótidos modificados con aminas
Ex/Em del conjugado: 651/672 nm
Coeficiente de extinción: 270.000 cm-1 m-1
Colorantes similares espectrales: Cy5™
Peso molecular: ∼1250

Reacción de conjugación típica
Puede conjugar reactivos de aminas con prácticamente cualquier proteína o péptido (el protocolo proporcionado está optimizado para anticuerpos IgG). Puede ampliar la reacción para cualquier cantidad de proteína, pero la concentración de la proteína debe ser al menos de 2 mg/ml para obtener unos resultados óptimos. Recomendamos probar tres grados de etiquetado distintos y emplear tres proporciones molares diferentes del reactivo en la proteína.

El éster NHS Alexa Fluor™ suele disolverse en dimetilformamida (DMF) anhidra o dimetilsulfóxido (DMSO) (D12345) de gran calidad, y la reacción se lleva a cabo en un tampón de bicarbonato sódico de 0,1–0,2 M, pH 8,3, a temperatura ambiente durante una hora. Dado que la pKa de la amina terminal es inferior a la del grupo amino épsilon de lisina, puede realizar un etiquetado más selectivo de la terminal amina mediante un tampón más cercano al pH neutro.

Purificación del conjugado
Los anticuerpos etiquetados se separan normalmente del tinte Alexa Fluor™ mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalentes. Para cantidades mucho mayores o menores de proteínas, seleccione un medio de filtración en gel con un corte de peso molecular adecuado o purifique por diálisis. Ofrecemos varios kits de purificación optimizados para diferentes cantidades de conjugado de anticuerpos:
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 0,5-1 mg (A33086)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 20-50 μg (A33087)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 50-100 μg (A33088)

Más información sobre el etiquetado de proteínas y anticuerpos
Ofrecemos una amplia selección de kits de etiquetado de anticuerpos y proteínas Molecular Probes™ que se ajustan a su material de partida y a su configuración experimental. Consulte nuestros kits de etiquetado de anticuerpos o utilice nuestra herramienta de selección química de etiquetado para otras opciones. Para obtener más información acerca de nuestros kits de marcado, lea la sección 1.2 sobrekits para marcado de proteínas y ácidos nucleicos del manual de Molecular Probes™.

Creamos conjugados personalizados
Si no encuentra lo que busca en nuestro catálogo en línea, le prepararemos el conjugado de anticuerpos o proteínas que desee. Nuestro servicio de conjugación personalizada es eficiente y confidencial, y garantizamos la calidad de nuestro trabajo. Contamos con la certificación ISO 9001:2000.