Kit de cuantificación de proteínas SILAC (LysC), DMEM:F-12

El kit de cuantificación de proteínas Thermo Scientific SILAC - DMEM:F12 se usa para el análisis específico de la expresión de proteínas por medio de la espectrometría de masas utilizando el etiquetado de isótopos estables con aminoácidos en cultivos de células (SILAC).

. Características del kit de cuantificación de proteínas Thermo Scientific SILAC - DMEM:F12:
• Eficaz: incorporación del 100 % de las etiquetas en proteínas de células vivas
• Reproducible: minimiza la variabilidad intraexperimental causada por la preparación diferencial de muestras
• Flexible: medios líquidos deficientes tanto en L-lisina como en L-arginina, lo que permite una cobertura más completa de los proteomas mediante el etiquetado de dobles aminoácidos isotópicos
• Compatible: etiquetado de proteínas expresado en una amplia variedad de líneas celulares de mamíferos adaptadas para crecer en medio DMEM:F12, incluyendo HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat y otros
• Suplementos de alta calidad: aminoácidos pesados con > 99 % de pureza isotópica; FBS dializado probado para asegurar que es estéril, sin endotoxinas, y compatible con cultivos celulares

Aplicaciones del kit de cuantificación de proteínas SILAC:
• Análisis cuantitativo de los cambios relativos en la abundancia de proteínas a partir de diferentes tratamientos celulares
• Análisis cuantitativo de proteínas para las que no hay anticuerpos disponibles
• Perfil de expresión de proteínas de células normales frente a células de enfermedades
• Identificación y cuantificación de cientos a miles de proteínas en un solo experimento

SILAC es un método potente para identificar y cuantificar los cambios diferenciales relativos en muestras de proteínas complejas. Este método emplea la incorporación metabólica in vivo de aminoácidos «pesados» etiquetados 13C o 15N en proteínas, seguida de análisis por espectrometría de masas (MS) para acelerar la identificación, caracterización y cuantificación completas de proteínas.

Debido a que los péptidos etiquetados con aminoácidos pesados y ligeros son químicamente idénticos, coeluyen durante el prefraccionamiento de la columna de fase inversa y, por lo tanto, se detectan simultáneamente durante el análisis de MS. A continuación, se utilizan las intensidades de pico relativas de múltiples péptidos isotópicamente distintos de cada proteína para determinar el cambio medio en la abundancia de proteínas en la muestra tratada.

Cada kit incluye todos los reactivos necesarios para etiquetar isotópicamente células con 13C6 L-lisina-2HCl, incluidos medios, aminoácidos pesados y ligeros, y suero dializado. Derivados de L-arginina-HCl pesados (n°. 88210, 89990) están disponibles por separado y se pueden combinar con los kits de cuantificación de proteínas SILAC Pierce para mejorar la cobertura de las etiquetas isotópicas de péptidos. Cuando se combinan con los productos de enriquecimiento de muestras de proteínas/péptidos Thermo Scientific, los kits de cuantificación de proteínas Pierce SILAC también permiten el análisis por MS de proteínas de baja abundancia, como proteínas de superficie celular, proteínas específicas de organelas y modificaciones de proteínas postranslacionales, como la fosforilación o la glicosilación.

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