Kit de cuantificación de proteínas SILAC (tripsina), DMEM

El kit de cuantificación de proteínas SILAC (tripsina), DMEM, Thermo Scientific se usa para el análisis específico de la expresión de proteínas por medio de la espectrometría de masas utilizando el etiquetado de isótopos estables con aminoácidos en cultivos de células (SILAC).

Las características del kit de cuantificación de proteínas SILAC, DMEM, Thermo Scientific incluyen:
• Eficaz: incorporación del 100 % de las etiquetas en proteínas de células vivas
• Reproducible: minimiza la variabilidad intraexperimental causada por la preparación diferencial de muestras
• Flexible: medios líquidos deficientes tanto en L-lisina como en L-arginina, lo que permite una cobertura más completa de los proteomas mediante el etiquetado de dobles aminoácidos isotópicos
• Compatible: etiquetado de proteínas expresado en una amplia variedad de líneas celulares de mamíferos adaptadas para crecer en medio DMEM, incluyendo HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat y otros
• Suplementos de alta calidad: aminoácidos pesados con >99 % de pureza isotópica; FBS dializado probado para asegurar que es estéril, sin endotoxinas, y compatible con cultivos celulares

Aplicaciones del kit de cuantificación de proteínas SILAC:
• Análisis cuantitativo de los cambios relativos en la abundancia de proteínas a partir de diferentes tratamientos celulares
• Análisis cuantitativo de proteínas para las que no hay anticuerpos disponibles
• Perfil de expresión de proteínas de células normales frente a células de enfermedades
• Identificación y cuantificación de cientos a miles de proteínas en un solo experimento

SILAC es un método potente para identificar y cuantificar los cambios diferenciales relativos en muestras de proteínas complejas. El método SILAC emplea la incorporación metabólica in vivo de aminoácidos «pesados» etiquetados ¹³C o ¹⁵N en proteínas, seguida de análisis por espectrometría de masas (MS) para acelerar la identificación, caracterización y cuantificación de proteínas.

Debido a que los péptidos marcados con aminoácidos pesados y ligeros son químicamente idénticos, coeluyen durante el prefraccionamiento de la columna de fase inversa y, por lo tanto, se detectan simultáneamente durante el análisis de MS. A continuación, se utilizan las intensidades de pico relativas de múltiples péptidos isotópicamente distintos de cada proteína para determinar el cambio medio en la abundancia de proteínas en la muestra tratada.

Los kits de Tripsina SILAC se suministran con ¹³C₆ ¹⁵N₂ L-lisina-2HCl y ¹³C₆ ¹⁵N₄ L-arginina-HCl para etiquetar y cuantificar péptidos que contienen lisina y arginina a partir de digestiones de proteínas de tripsina. Cada kit incluye también 2 x 500 ml de medio y de suero dializado. Cuando se combinan con los productos de enriquecimiento de muestras de proteínas / péptidos Thermo Scientific, los kits de cuantificación de proteínas SILAC también permiten el análisis por MS de proteínas de baja abundancia, como proteínas de superficie celular, proteínas específicas de organelas y modificaciones de proteínas postranslacionales, como la fosforilación o la glicosilación.

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