Kit de transfección de ARNip II Silencer™

Este kit Ambion™ es para la optimización de protocolos de transfección para tipos celulares específicos. Incluye 0,4 ml de cadaMás información

Número de catálogo	Cantidad
AM1631	1 ml

Número de catálogo AM1631

Precio (CLP)

911.781

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Cantidad:

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Este kit Ambion™ es para la optimización de protocolos de transfección para tipos celulares específicos. Incluye 0,4 ml de cada uno de los dos agentes de transfección; agente de transfección de amina siPORT™ y agente de transfección NeoFX™ siPORT™ junto con controles ARNip.
• El kit de compatibilidad de línea celular amplia incluye agentes de transfección de amina siPORT™ y NeoFX™ siPORT™
• El kit de optimización de protocolos más rápida incluye GAPDH listo para transfeccionar y controles ARNip negativos. La elección del agente de transfección es fundamental para los experimentos de silenciamiento de genes. Cada agente de transfección tiene una eficacia de administración diferente cuando se usa con diferentes tipos de células, y la eficacia de transfección general y el grado de silenciamiento de genes dependen de la naturaleza del complejo del agente de transfección/ARNip. Si usted es nuevo en la investigación de ARNi o si desea ampliar sus experimentos para incluir diferentes líneas celulares, el kit de transfección II de ARNip Silencer™ le permite optimizar sus protocolos de transfección para tipos celulares específicos. El kit de transfección II de ARNip Silencer™ incluye el agente de transfección de amina siPORT™ (una mezcla de poliamina) y el nuevo agente de transfección NeoFX™ siPORT™ (una mezcla de lípidos catiónicos y neutros). Estos reactivos admiten transfecciones de ARNip eficaces y reproducibles en diferentes tipos de células. Además, se pueden utilizar para transfeccionar células durante la subcultivo, lo que ahorra así un día completo de valioso tiempo sin aumentar la citotoxicidad. Además de contener una selección de agentes de transfección, este kit incluye un ARNip sintético GAPDH bien caracterizado que puede usarse para optimizar las condiciones de transfección. Los resultados también pueden verificarse a nivel de proteína con anticuerpos específicos de GAPDH. También se proporciona un ARNip de control negativo codificado para confirmar la especificidad del ARNip de interés y para demostrar la ausencia de efectos tóxicos no específicos.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Tipo de controlControl negativo, control positivo

Para utilizar con (aplicación)Transfección de ARNip

Línea de productosSilencer, Ambion

Tipo de productoKit de optimización de transfección de ARNip

Cantidad1 ml

Tipo de RNAiARNip

Tipo de célulaMamífero

FormatoKit

Tipo de muestraARNip sintético, ARNmi

Transfection TechniqueTransfección basada en lípidos

Unit SizeEach

Contenido y almacenamiento

El agente de transfección NeoFX™ siPORT™ y el agente de transfección de amina siPORT™ deben almacenarse a 4 °C. El ARNip GAPDH y el ARNip de control negativo deben almacenarse a –20 °C.

Preguntas frecuentes

What are the benefits of using a vector to deliver RNAi?

Vector technologies allow you to:

Achieve transient or stable target knockdown
Perform RNAi in any cell type, even hard-to-transfect, primary, and non-dividing cells
Regulate gene inhibition with inducible siRNA expression
Select for a pure population of cells stably expressing an siRNA sequence
Control gene expression in vivo with tissue-specific promoters

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Why are my cells dying after transfection?

We would suggest running a transfection reagent control only to determine if your cells are sensitive to the transfection reagent. Additionally, you can try using different cell densities and siRNA concentrations to diminish any toxic effects from the transfection itself.

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I transfected my siRNA and the mRNA levels are down, but the protein is not. Why is that?

In some cases, knockdown of a protein can be affected by other variables such as protein turnover rate, even though the RNA is knocked down. Additionally, a longer time course may be needed to see an effect on protein compared to mRNA.

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I am not getting my target knockdown. What could be the cause of this?

Please see the following possibilities and suggestions:

- How many siRNA did you test? Is there any knockdown? If there is no knockdown (<10%) in any of the siRNA, then the assay is likely the problem. Try using a different qRT-PCR assay to assess knockdown.
- What was the positioning of the qRT-PCR assay target site relative to the cut site for the siRNA? If greater than 3,000 bases away, the problem could be alternative splice transcripts.
- What are the Cts for the experiment? They should be below 35 in a 40-cycle qRT-PCR experiment.
- Did you confirm the siRNA got into the cell? We recommend using a validated positive control siRNA to check the transfection efficiency.

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I am not getting any knockdown with my siRNA. What do you suggest I try?

Please see the following possibilities and suggestions:

- Were the mRNA levels checked? The most reliable method is real-time PCR. In some cases, knockdown of a protein can be affected by other variables, such as protein turnover rate, even though the RNA is knocked down.
- How is the RNA being isolated? Has the quality of the isolated RNA been checked? Ensure that the RNA has not been degraded.
- Was a positive control used? This can help to determine whether the reagents are working and whether the siRNA was delivered correctly to the cell. Run your experiment in parallel with the positive control siRNA.
- Was a transfection control used? What is the percentage of transfected cells?
- Was a time course used? Generally, gene silencing can be assessed as early as 24 hours posttransfection. However, the duration and level of knockdown are dependent on cell type and concentration of siRNA.
- Was optimization of transfection conditions performed? You can try using different cell densities and siRNA concentrations.
- Which concentration of siRNA did you use? We recommend testing multiple concentrations between 5 nM and 100 nM.

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