El ensayo Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 555 HCS es una excelente alternativa a los ensayos de proliferación tradicionales que se ha optimizado para aplicaciones de adquisición de imágenes de alto contenido. En este ensayo, el análogo a la timidina modificado EdU se incorpora de forma eficaz al ADN recién sintetizado y etiquetado con fluorescencia mediante un colorante brillante y fotoestable Alexa Fluor™ en una reacción clic rápida y muy específica. Este etiquetado fluorescente de las células proliferantes es preciso y compatible con métodos de anticuerpos gracias al protocolo clic leve.

El ensayo Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 555 HCS es:

• Simple: funciona la primera vez, cada vez, en menos tiempo
• Eficaz: no es necesario realizar pasos de desnaturalización o tratamientos intensos
• Suave con las muestras: mejor preservación de la morfología celular, la estructura del antígeno y la integridad del ADN
• Coherente: no depende de lotes de anticuerpos variables para la detección

Los métodos de detección de proliferación más exactos se basan en la incorporación y la medición de los análogos nucleósidos en ADN recién sintetizado con bromodesoxiuridina (BrdU), un análogo utilizado con frecuencia. El ADN etiquetado mediante BrdU se cuantifica mediante anticuerpos anti-BrdU tras la desnaturalización del ADN a través de métodos intensos (HCl, calor o enzimas) para exponer las moléculas de BrdU. Este paso tiene una larga duración y resulta difícil de llevar a cabo de manera uniforme. El tratamiento intenso también puede afectar negativamente a la calidad e integridad de la muestra, lo que hace que la cotinción con otros anticuerpos resulte complicada.

Metodología de proliferación mejorada
El ensayo Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 555 HCS proporciona una alternativa mejorada con respecto a los ensayos BrdU para medir la proliferación celular. EdU (5-etinil-2'-desoxiuridina) es un nucleósido análogo de la timidina que se incorpora al ADN durante la síntesis de ADN activa. Gracias a Click-iT™ EdU, basta con una permeabilización con detergente y una fijación suave para que el reactivo de detección Click-iT™ EdU basado en moléculas pequeñas obtenga acceso al ADN. Como consecuencia, el ensayo Click-iT™ EdU HCS no solo es fácil de usar, sino que también es más exacto y compatible con el análisis del ciclo celular y otros objetivos extracelulares o intracelulares verdaderamente ricos en contenido y resultados.

El kit está optimizado para aplicaciones de adquisición de imágenes de alto contenido; visite el área de tecnología Click-iT™ de nuestro sitio web para conseguir kits diseñados para microscopía de fluorescencia, microplacas o plataformas de citometría de flujo.

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Notas:
El ensayo Click-iT™ puede emplearse en células en cultivo o in vivo siguiendo la administración de EdU a través de métodos de alimentación o inyección.
El ensayo Click-iT™ puede emplearse con BrdU en experimentos de pulso doble mediante el anticuerpo ant-BrdU (clon MoBu-1), que no presenta una reacción cruzada con EdU.
La tecnología Click-iT™ es compatible con inmunohistoquímica, inmunocitoquímica y colorantes fluorescentes que presentan tolerancia ante la fijación o se han diseñado para el etiquetado celular fijo.