Las características de estos indicadores incluyen:
• Sustrato de caspasa-3/7 optimizado para el análisis de la apoptosis
• Fácil de usar, añadir y leer; no se requiere lisis celular
• Usar para mediciones de tiempo; seleccione el punto de tiempo de su interés
• Compatible tanto con la obtención de imágenes de fluorescencia de células vivas como con los métodos de fijación basados en formaldehído
• Capacidad para combinación múltiple con otros reactivos fluorescentes para confirmar la apoptosis en la misma célula o población celular

Reactivo de detección CellEvent™ Caspase-3/7 Green: Máximo de absorción/emisión de ∼ 502/530 nm. Detectable con el conjunto de filtros tradicional FITC/GFP.

Reactivo de detección CellEvent™ Caspase-3/7 Red: Máximo de absorción/emisión de ∼ 590/610 nm. Detectable con el conjunto de filtros rojo Texas tradicional.

Los reactivos de detección CellEvent™ Caspase-3/7 Red y CellEvent™ Caspase-3/7 Green se suministra en polvo seco. Solo tiene que añadir 100 μl de PBS para secar el polvo y generar una solución de 100X de stock. Diluya esta solución madre de 100X 1:100 en medios completos, tiña las células de 30 a 60 minutos y analice con microscopio de fluorescencia.

El reactivo de detección CellEvent™ Caspase-3/7 Red también se proporciona como solución DMSO ya preparada. La solución DMSO es una solución madre de 400X, que está lista para su uso. Solo diluya en medios de crecimiento 1:400 y tiña las células de 3 a 60 minutos.

Para evitar que las células apoptóticas se laven, no es necesario lavar al final de la limpieza. Las células teñidas se pueden analizar en vivo o se pueden fijar con una solución de paraformaldehído al 4 %, como paraformaldehído Image-IT™ al 4 % en tampón de fosfato 0,1 M pH 7,4, n.º de cat. I28800. Estas células fijas se pueden procesar aún más para el flujo de trabajo ICC.

Características del sustrato
Los reactivos de detección CellEvent Caspase-3/7 son un péptido de cuatro aminoácidos (DEVD) conjugado con un colorante de unión de ácidos nucleicos. La secuencia peptídica DEVD es un sitio de fragmentación de la caspasa 3/7. El colorante conjugado no es fluorescente hasta que se disocia del péptido y se une al ADN.

Principios de acción
El reactivo de detección verde CellEvent caspasa 3/7 es intrínsecamente no fluorescente, ya que el péptido DEVD inhibe la capacidad del colorante de unirse al ADN. Sin embargo, tras la activación de la caspasa-3/7 en células apoptóticas, el péptido DEVD se escinde, lo que permite que el colorante se adhiera al ADN y produzca una respuesta fluorogénica brillante.

Protocolo simple de tres pasos
Para utilizar el reactivo de detección CellEvent Caspase-3/7, simplemente agréguelo a las células, incube de 30 a 60 minutos y visualice. Las células apoptóticas con caspasa-3/7 activada tendrán núcleos rojos o verdes brillantes, mientras que las células sin caspasa-3/7 activada tendrán una señal de fluorescencia mínima.

La versatilidad del ensayo permite la detección y fijación de células vivas
Nuestro sólido ensayo permite a los investigadores examinar la activación de la caspasa-3/7 en células vivas. Además, dado que los pasos de lavado no son necesarios para la detección, se conservan las células apoptóticas frágiles que se suelen perder durante los pasos de lavado. Lo más importante es que la señal fluorescente del reactivo de detección CellEvent caspasa 3/7 pueda sobrevivir a la fijación y a la permeabilización. Esto proporciona la flexibilidad necesaria para realizar ensayos finales e investigar otras proteínas de interés mediante inmunohistoquímica.