Kit de proliferación celular Click-iT™ Plus EdU para adquisición de imágenes, colorante Alexa Fluor™ 488

Los kits de imágenes de proliferación celular Click-iT Plus EdU Alexa Fluor se han optimizado para aplicaciones de microscopio fluorescente y son una excelente alternativa a los ensayos de proliferación tradicionales. En este ensayo, el análogo modificado de la timidina EdU (5-etinil-2'-desoxiuridina, un análogo nucleósido de la timidina) se incorpora eficazmente al ADN recién sintetizado y se etiqueta fluorescentemente con una coloración brillante y fotoestable Alexa Fluor™ en una reacción de clic rápida, muy específica y suave.

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• Fácil: funciona a la primera cada vez y en menos tiempo que los métodos tradicionales
• Eficiente: sin pasos de desnaturalización ni tratamientos severos
• Resultados ricos en contenido: preservación mejorada de la morfología celular, la estructura del antígeno, la señal fluorescente GFP y la integridad del ADN
• Consistente: no depende de lotes de anticuerpos variables para la detección

El kit contiene todos los componentes necesarios para marcar y detectar la EdU incorporada, así como para realizar análisis del ciclo celular en muestras de células adherentes. Para el análisis del ciclo celular, el kit incluye un tinte fluorescente de color azul Hoechst 33342. El kit contiene reactivos suficientes para etiquetar 50 cubreobjetos 18 x 18 usando 500 µl de tampón de reacción por prueba.

Evite los tratamientos severos asociados al método BrdU
La medición de los cambios en la proliferación celular es un método fundamental para evaluar la salud celular, determinar la genotoxicidad y evaluar fármacos anticancerígenos. El método más preciso para llevar a cabo este procedimiento es mediante la medición directa de la síntesis de ADN. El método tradicional utiliza el análogo nucleósido BrdU (5-bromo-2'-desoxiuridina, un análogo nucleósido de la timidina), que se incorpora al ADN recién transcrito. Tras la incorporación, las muestras se tratan con métodos intensos (HCl, calor o enzimas) para desnaturalizar el ADN y exponer las moléculas BrdU a la detección por parte de los anticuerpos anti-BrdU. Sin embargo, el método BrdU para medir la proliferación celular requiere mucho tiempo y resulta difícil de ejecutar de manera uniforme. Los severos tratamientos necesarios para este método pueden afectar negativamente a la integridad de la muestra, a la morfología celular, a la calidad de la imagen y a la capacidad de multiplexar.

El ensayo Click-iT™ Plus EdU mide la tasa de la nueva síntesis de ADN basada en la incorporación de la EdU analógica nucleósido en el ADN. La detección se obtiene mediante una reacción catalizada «clic» que normalmente se completa en 30 minutos. La reacción clic utiliza mitades bioortogonales (biológicamente únicas) para marcar de manera fluorescente las células proliferantes, lo que produce fondos bajos y una sensibilidad de detección muy alta. Debido a las condiciones moderadas de reacción, el ensayo Click-iT™ Plus puede determinar con exactitud la proliferación celular al mismo tiempo que mantiene la morfología celular, la integridad del ADN, los lugares de unión de antígenos y la señal fluorescente de GFP. La conservación de la integridad del ADN permite la tinción del ADN, incluida la tinción con tintes utilizados para el análisis del ciclo celular.