EnzChek™ Phospholipase A2 Assay Kit
EnzChek™ Phospholipase A2 Assay Kit
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EnzChek™ Phospholipase A2 Assay Kit

Estos kits toman el ensayo independiente para la fosfolipasa A2, PLA2 (A10072) y combinan las Ez y los lípidos necesariosMás información
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Número de catálogoCantidad
E102171 kit
Número de catálogo E10217
Precio (CLP)
616.254
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Cantidad:
1 kit
Precio (CLP)
616.254
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Estos kits toman el ensayo independiente para la fosfolipasa A2, PLA2 (A10072) y combinan las Ez y los lípidos necesarios para realizar 2 ensayos completos de microplacas de 96 pocillos que controlan la actividad en preparaciones enzimáticas purificadas y lisados celulares. El kit EnzChek de fosfolipasa A2 proporciona suficientes reactivos para 2 microplacas, con volúmenes de 200 µl en formato de 96 pocillos para realizar una monitorización fluorométrica continua de PLA2. Este producto ofrece una alternativa a nuestro reactivo (B7701), (bis-BODIPY® FL C11-PC), y proporciona un sustrato selectivo PLA2 y uno que es radiométrico, lo que reduce las variaciones producidas por las condiciones de instrumentación y ensayo. La fosfolipasa A2 o PLA2 representa una familia de enzimas que hidrolizan el enlace del éster sn-2 de los fosfolípidos. Las actividades de estas enzimas desempeñan un papel importante en los trastornos cardiovasculares, inflamatorios y del sistema nervioso, así como en los cánceres. El sustrato EnzChek® de fosfolipasa A2 proporciona un control rápido, sensible y continuo en tiempo real de las actividades de la enzima PLA2. Este sustrato único es selectivo para PLA2 y puede usarse en un modo de detección de intensidad o en la radiometría. En el modo de detección basado en la intensidad, la actividad PLA2 se controla mediante el aumento de intensidad de una sola longitud de onda a aproximadamente 515 nm. En el análisis radiométrico, que se basa en la distinta emisión de transferencia de energía de resonancia de la fluorescencia (FRET) de este sustrato antes y después de la escisión, la enzima PLA2 se detecta por cambios en la relación de intensidad de la emisión a 515/575 nm con excitación a ≈ 460 nm. Cualquiera de los dos modos de detección proporciona un método sencillo con fondo bajo, alta sensibilidad y alta especificidad para PLA2.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Método de detecciónIntensidad de la fluorescencia
Tipo de coloranteBODIPY™ FL
Tipo de filtroFiltro (fluoresceína) FITC
Cantidad1 kit
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
Propiedades de sustratoSustrato a base de lípidos, sustrato químico
Tipo de sustratoSustrato de fosfolipasa
Enzima dianaFosfolipasa
ColorMezcla, verde
EmissionRadiométrico: 460-490⁄515, 575, basado en la intensidad: 460-490⁄515
Para utilizar con (aplicación)Ensayo de fosfolipasa A2
Para utilizar con (equipo)Lector de microplacas
Línea de productosEnzChek, Molecular Probes
Tipo de productoEnsayo de fosfolipasa
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
1 kit. Almacenar el kit a <-20 °C, protegido de la luz, desecado

Preguntas frecuentes

What is the LoD for the EnzChek Phospholipase A2 Assay Kit (Cat. No. E10217)?

The EnzChek Phospholipase A2 Assay Kit (Cat. No. E10217) can detect PLA2 at 0.05 U/mL or lower.

The FRET-based substrate Red/Green BODIPY PC-A2 shows no change in fluorescence upon enzymatic cleavage. I'm not seeing an increasing green signal with higher concentrations of phospholipase A2 and no change in red fluorescence. Why is this?

There are numerous factors that can interfere with FRET-based detection. Here are a few items to consider:

a) Is there any component in the reaction solution that can quench green fluorescence?
b) Is there any component in the reaction solution that autofluoresces in the green or red emission range?
c) Too high of a substrate concentration may result in diffusional FRET: Lower the final working concentration of the substrate.
d) Ensure adequate dispersal of the substrate during the reaction. BODIPY dyes are very hydrophobic, and aggregates of the green product, BODIPY FL, can form an excimer and emit in the red range.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

You provide Phospholipase A2 from honey bee venom in the EnzChek Phospholipase A2 Assay Kit. Can the kit be used with phospholipase A2 from other species?

Yes, phospholipase A2 from other species may be used as long as the phospholipase A2 can hydrolyze the sn-2 ester linkage of phospholipids and the enzymatic reaction can be done within a pH of >3 and <9.

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Citations & References (3)

Citations & References
Abstract
Crystal structure of the predicted phospholipase LYPLAL1 reveals unexpected functional plasticity despite close relationship to acyl protein thioesterases.
Authors:Bürger M, Zimmermann TJ, Kondoh Y, Stege P, Watanabe N, Osada H, Waldmann H, Vetter IR,
Journal:J Lipid Res
PubMed ID:22052940
'Sequence homology indicates the existence of three human cytosolic acyl protein thioesterases, including APT1 that is known to depalmitoylate H- and N-Ras. One of them is the lysophospholipase-like 1 (LYPLAL1) protein that on the one hand is predicted to be closely related to APT1 but on the other hand might ... More
Alterations in cerebrospinal fluid glycerophospholipids and phospholipase A2 activity in Alzheimer's disease.
Authors:Fonteh AN, Chiang J, Cipolla M, Hale J, Diallo F, Chirino A, Arakaki X, Harrington MG,
Journal:
PubMed ID:23868911
'Our aim is to study selected cerebrospinal fluid (CSF) glycerophospholipids (GP) that are important in brain pathophysiology. We recruited cognitively healthy (CH), minimally cognitively impaired (MCI), and late onset Alzheimer''s disease (LOAD) study participants and collected their CSF. After fractionation into nanometer particles (NP) and supernatant fluids (SF), we studied ... More
Group V secretory phospholipase A2 plays a pathogenic role in myocardial ischaemia-reperfusion injury.
Authors:Yano T, Fujioka D, Saito Y, Kobayashi T, Nakamura T, Obata JE, Kawabata K, Watanabe K, Watanabe Y, Mishina H, Tamaru S, Kugiyama K,
Journal:Cardiovasc Res
PubMed ID:21169294
Group V secretory phospholipase A(2) (sPLA(2)-V) is highly expressed in the heart. This study examined (i) the role of sPLA(2)-V in myocardial ischaemia-reperfusion (I/R) injury and (ii) the cooperative action of sPLA(2)-V and cytosolic PLA(2) (cPLA(2)) in myocardial I/R injury, using sPLA(2)-V knockout (sPLA(2)V(-/-)) mice. Myocardial I/R injury was created ... More