Exonuclease III (ExoIII) Thermo Scientific muestra cuatro actividades catalíticas. La actividad de exodesoxirribonucleasa 3'→5' de ExoIII es específica para ADN bicatenario. ExoIII degrada el ADNds de extremos romos, 5'-protuberantes o cortes, libera 5'-mononucleotidos de los 3'-extremos de las hebras de ADN y produce estiramientos de ADN monocatenario. No está activa en extremos de 3'-voladizo de ADN que tienen al menos cuatro bases de largo y no llevan un residuo C de extremo 3' en ADN monocatenario, o en nucleótidos ligados a fosforotioato.

La actividad 3'-fosfatasa Exolll elimina el fosfato del extremo 3', lo que genera un grupo 3'-OH. La actividad RNasa H ExoIII degrada exonucleolíticamente la cadena de ARN en híbridos ARN-ADN. La actividad apurínicos/apirimidínicos-endonucleasa Exolll fragmenta enlaces de fosfodiéster en sitios apurínicos o apirimidínicos para producir extremos 5' que tienen residuos de desoxirribosa 5'-fosfato sin base.

Características destacadas

• Activa en tampones de enzimas de restricción

Aplicaciones

• Creación de eliminaciones unidireccionales en fragmentos de ADN junto con la nucleasa S1
• Generación de una cadena monocatenaria para la secuenciación del ADN
• Mutagénesis de sitio dirigido
• Clonación de productos de PCR
• Preparación de sondas específicas de cadena

Nota

El índice de digestión de ADN mediante ExoIII depende de la temperatura, la concentración de sal y la proporción molar de ADN a la enzima en la mezcla de reacción. Las condiciones de reacción óptimas deben determinarse experimentalmente.