Klenow Fragment, LC (2 U/μL)

Klenow Fragment Thermo Scientific es el fragmento de gran tamaño de la ADN polimerasa I. Muestra actividad polimerasa 5'→3' yMás información

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EP0054	300 U

Número de catálogo EP0054

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300 U

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Klenow Fragment Thermo Scientific es el fragmento de gran tamaño de la ADN polimerasa I. Muestra actividad polimerasa 5'→3' y actividad exonucleasa 3'→5' (corrección), pero carece de la actividad exonucleasa 5'→3' de la ADN polimerasa I.

Características destacadas

• Incorpora nucleótidos modificados (p. ej., los nucleótidos Cy3-, Cy5- y los marcados con aminoalilo, biotina, digoxigenina y mediante fluorescencia)
• Activa en tampones de enzimas de restricción, transcripción inversa, PCR, RT y ligasa de ADN T4

Aplicaciones
• Extremos romos de ADN mediante el relleno de extremos 5
• Etiquetadode ADN mediante cebado aleatorio
• Etiquetado por relleno de extremos 5' de dsADN
• Secuenciación de ADN por el método Sanger
• Mutagénesis específica del sitio del ADN con oligonucleótidos sintéticos
• Síntesis de la segunda cadena de ADNc

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

PolimerasaDNA Polymerase I

Tipo de productoFragmento Klenow

Cantidad300 U

Concentración2 U/μl

Unit SizeEach

Preguntas frecuentes

What are the differences between Thermo Scientific DNA Polymerase I, Klenow Fragment, and Klenow Fragment (exo-)?

Thermo Scientific DNA Polymerase I possesses 5′?3′ DNA synthesis activity, 3′?5′ exonuclease (proofreading) activity, and 5′?3′ exonuclease activity. Klenow Fragment is the large fragment of DNA polymerase I. It exhibits 5′?3′ polymerase activity and 3′?5′ exonuclease (proofreading) activity, but lacks 5′?3′ exonuclease activity. Klenow Fragment, exo-, is also the large fragment of DNA polymerase I. It exhibits 5′?3′ polymerase activity, but lacks the 3′?5′ and 5′?3′ exonuclease activities.

What conditions are optimal for fill-in reactions using Klenow (Large fragment of DNA Polymerase)?

Klenow can be used to "fill in" 5' overhangs of double-stranded DNA fragments using common restriction endonuclease buffers. We recommend REact 2 buffer (1X concentration is 50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2) , but other buffers will also work.

Fill-in Reaction Conditions:

1. Dilute Large Fragment of DNA Polymerase I to 0.5 U/µL with Klenow Dilution Buffer.
2. To a 1.5-mL microcentrifuge tube on ice, add: 10X REact 2 Buffer - 3 µL, 0.5 mM dATP - 1 µL, 0.5 mM dCTP - 1 µL, 0.5 mM dGTP - 1 µL, 0.5 mM dTTP - 1 µL, DNA 0.5-1 µg, Large fragment of DNA Polymerase I - 1 µL, Autoclaved distilled water to 30 µL.
3. Mix gently and centrifuge briefly to bring the contents to the bottom of the tube.
4. Incubate at room temperature for 10-15 minutes or 20 minutes on ice.
5. Terminate fill-in reaction by phenol extraction.

To label the DNA fragment, use 1-2 µL of [alpha-³²P]dNTP (400 Ci/mmol, 10 mCi/mL) (24-48 pmoles) instead of the corresponding cold dNTP.

Note: Thermo Fisher Scientific also offers an Exo minus Klenow, which is provided with its own buffers.