phi29 DNA Polymerase (10 U/μL)
phi29 DNA Polymerase (10 U/μL)
Thermo Scientific™

phi29 DNA Polymerase (10 U/μL)

La polimerasa de ADN Thermo Scientific phi29 es una polimerasa altamente procesiva (hasta más de 70 kb) que presenta unaMás información
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Número de catálogoCantidad
EP00912,5 μg (250 U)
EP009210 μg (1000 U)
EP009450 μg (5000 U)
Número de catálogo EP0091
Precio (CLP)
-
Cantidad:
2,5 μg (250 U)
Pedido a granel o personalizado
La polimerasa de ADN Thermo Scientific phi29 es una polimerasa altamente procesiva (hasta más de 70 kb) que presenta una fuerte actividad de desplazamiento de la cadena, lo que permite una amplificación isotérmica de ADN muy eficaz. La polimerasa de ADN phi29 también posee una actividad exonucleasa (corrección) de 3’ → 5' que actúa preferentemente en ADN monocatenario o ARN. Por lo tanto, se recomienda encarecidamente la utilización de primers modificados de 3'.

Aspectos destacados

• Una mayor actividad procesiva y de desplazamiento de hebras entre las ADN polimerasas conocidas: se pueden sintetizar más de 70 kb de tramos de ADN
• Síntesis de ADN muy precisa
• Producción extremadamente alta de ADN amplificado incluso a partir de cantidades diminutas de plantilla
• Los productos de amplificación se pueden utilizar directamente en aplicaciones posteriores (PCR, digestión restrictiva, identificación de genotipos de SNP, etc.)

Aplicaciones

• Amplificación de círculo rodante (RCA): generación de nanoplantillas de ADN periódicas
• Amplificación de desplazamiento múltiple (MDA)
• Amplificación neutral del genoma completo (WGA, ver figura 1 en datos de apoyo):
• Amplificación de ADN para la detección de SNP y STR
• Amplificación sin células de ADN a partir de células individuales
• Organismos patógenos o metagenomas
• Amplificación de ADN a partir de muestras de manchas de sangre en papel de filtro
• Preparación de plantillas de ADN para secuenciación
• Amplificación de ADN con primado de proteínas
• Genotipado in situ con sondas candado
Clonación basada en recombinación
• Clonación de ADN letal sin células
• Amplificación de ADN primado de ARN

Nota

La adición de pirofosfosfatasa a la mezcla de reacción con ADN polimerasa phi29 puede mejorar la síntesis de ADN.

El uso de esta enzima en determinadas aplicaciones puede estar asegurado por patentes y puede requerir una licencia.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
Concentración10 U/μL
Temperatura óptima de reacción30°C
Tiempo de reacción4 hours
Condiciones de envíoDry Ice
Para utilizar con (aplicación)MDA-WGA, RCA
Polimerasaphi29 DNA Polymerase
Tipo de productoStand-alone enzyme
Cantidad2,5 μg (250 U)
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
• phi29 DNA Polymerase (250 units at 10 U/μL)
• 10X Reaction Buffer for phi29 DNA Polymerase
• Store at –15 to –25°C.

Preguntas frecuentes

What is the error rate of phi29 DNA Polymerase?

The error rate of phi29 DNA Polymerase is 1 x 10-5.
The error rate of phi29 DNA Polymerase was measured according to the method described in literature:
Mielinis, P., Sukackaitė, R., Serapinaitė, A., Samoilovas, F., Alzbutas, G., Matjošaitis, K., & Lubys, A. (2021). MUA-based molecular indexing for rare mutation detection by Next-Generation sequencing. Journal of Molecular Biology, 433(19), 167209. https://doi.org/10.1016/j.jmb.2021.167209

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Can I use phi29 DNA Polymerase to incorporate 5-methyl-dCTP?

phi29 DNA Polymerase should be able to incorporate 5-methyl-dCTP nucleotides and other modified nucleotides.
The incorporation of modified nucleotides by phi29 DNA Polymerase can be reviewed in the literature:
Jakubovska, J., Tauraitė, D., Birštonas, L., & Meškys, R. (2018). N 4-acyl-2′-deoxycytidine-5′-triphosphates for the enzymatic synthesis of modified DNA. Nucleic Acids Research, 46(12), 5911–5923. https://doi.org/10.1093/nar/gky435

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What is the minimal recommended time for amplification with phi29 DNA Polymerase?

The optimal reaction time for DNA amplification with phi29 DNA Polymerase is 4 hours. For samples with ≥1 pg of DNA input, DNA amplification time can be shortened to 2 hours if maximizing product yield is not essential.

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Can phi29 DNA Polymerase be used with liquid media culture or colonies?

Yes. phi29 DNA Polymerase can work with different types of sample input such as purified DNA, liquid media culture, agar plate colonies, etc.

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Can phi29 DNA Polymerase be heat-inactivated?

Yes, we recommend heat-inactivating phi29 DNA Polymerase at 65 degrees C for 10 min.

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