Transcriptasa inversa RevertAid H Minus (200 U/μl)
Transcriptasa inversa RevertAid H Minus (200 U/μl)
Thermo Scientific™

Transcriptasa inversa RevertAid H Minus (200 U/μl)

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La transcriptasa inversa RevertAid H Minus Thermo Scientific es una RT recombinante M-MuLV. La enzima posee una actividad polimerasa dependiente de ARN y dependiente de ADN, pero carece de actividad ARNasa H debido a la mutación de punto en el dominio ARNasa H. La transcriptasa inversa RevertAid H Minus no degrada el ARN en híbridos ARN-ADN durante la síntesis de la primera cadena de ADNc, y por lo tanto se obtiene una alta producción de ADNc de longitud completa a partir de plantillas largas. La transcriptasa inversa RevertAid H Minus mantiene la actividad en un amplio rango de temperaturas (de 42 a 50 °C).

Aspectos destacados

• Alta producción de ADNc de primera cadena de longitud completa hasta 13 kb
• Actividad óptima entre 42 y 45 °C
• Activa hasta a 55 °C
• Incorpora nucleótidos modificados (por ejemplo, Cy3-, Cy5-, nucleótidos marcados con rodamina, aminoalilo y fluoresceína)

Aplicaciones

• Primera cadena de síntesis de ADNc para RT-PCR y RT-PCR en tiempo real
• Transcripción inversa a temperaturas elevadas para reducir los efectos de la estructura secundaria
• Síntesis de ADNc para clonación y expresión
• Generación de sondas de ADNc etiquetadas para chips de ADN
• Etiquetado de ADN
• Análisis de ARN por extensión de primers

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Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoStand-alone Enzyme
Temperatura óptima de reacciónDe 42 °C a 45 °C
Cantidad5 x 10.000 unidades
Formato de reacciónComponentes separados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaRevertAid H Minus
Actividad de la ribonucleasa HReducido
Condiciones de envíoDry Ice
Tamaño (producto final)Hasta 13 kb
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Concentración200 U/μl
Velocidad de reacción60 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
La transcriptasa inversa RevertAid H Minus (200 U/μl) se suministra con tampón de reacción 5X (250 mM de Tris-HCl [pH 8,3 a 25 °C], 250 mM de KCl, 20 mM de MgCl2, 50 mM de DTT).
Almacenar a - 20 °C.

Preguntas frecuentes

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H-minus RT or Maxima H-minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H-minus RTs for template-independent addition of C nucleotides.

Do Thermo Scientific reverse transcriptases (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT, and Maxima H-minus RT) possess terminal deoxynucleotidyl (TdT) activity?

All Thermo Scientific reverse transcriptases possess intrinsic TdT activity although at varying degrees depending upon the reaction conditions. For addition of template-independent C nucleotides (as for SMART and RACE experiments), this specific TdT activity can be induced by Mn2+. We would recommend Maxima H- or RevertAid H- minus RTs for this purpose.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

For reverse transcription, how important is the quality of RNA template?

RNA purity and integrity are essential for synthesis and quantification of cDNA. Always assess the integrity of RNA prior to cDNA synthesis. Use freshly prepared RNA. Multiple freeze/thaw cycles of the RNA sample and synthesized cDNA is not recommended. Avoid RNase contamination and discard low quality RNA.

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H Minus RT or Maxima H Minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H Minus RTs for template-independent addition of C nucleotides. In contrast, reverse transcriptases with intrinsic RNase H activity are often favored in 1-step RT-qPCR applications.

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