Transcriptasa inversa Maxima (200 U/μ l)
Transcriptasa inversa Maxima (200 U/μ l)
Thermo Scientific™

Transcriptasa inversa Maxima (200 U/μ l)

La transcriptasa inversa (RT) Thermo Scientific Maxima se obtuvo a través de la evolución in vitro de la transcriptasa inversaMás información
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La transcriptasa inversa (RT) Thermo Scientific Maxima se obtuvo a través de la evolución in vitro de la transcriptasa inversa M-MuLV.La enzima posee una actividad polimerasa dependiente de ARN y ADN, así como actividad ARNasa H.La enzima modificada mediante ingeniería genética ofrece una termoestabilidad y una resistencia considerablemente mejoradas, así como mayores tasas de síntesis en comparación con la transcriptasa inversa (RT) M-MuLV natural.

Maxima Reverse Transcriptase es capaz de hacer una síntesis reproducible del ADNc a partir de una amplia variedad de cantidades de entrada de ARN total (de 1 pg a 5 μg) a temperaturas elevadas (entre 50 y 65 °C), lo que hace que esta enzima sea una herramienta ideal para la RT-qPCR en dos pasos (consulte los materiales de referencia).

Gracias a su alta termoestabilidad, la enzima Maxima mantiene su actividad completa durante toda la reacción de transcripción inversa, genera los rendimientos más altos de ADNc y es capaz de sintetizar transcripciones de ARN muy largas, incluso de hasta 20 kb.La temperatura de reacción se puede aumentar hasta los 65 °C para una transcripción eficiente de las regiones de ARN con una elevada estructura secundaria o para mejorar la especificidad mediante cebadores específicos del gen.Gracias a su elevada tasa de síntesis, la reacción de la transcriptasa inversa se puede completar en 15-30 minutos.

Aspectos destacados

• Alta producción de ADNc de longitud completa de hasta 20 kb
• Activa hasta a 65 °C
• Termoestable: activa al 90 % tras incubación a 50 °C durante 60 minutos
• Alta sensibilidad: síntesis reproducible de ADNc a partir de una amplia gama de cantidades totales de ARN (de 1 pg a 5 μg)
• Eficiente: síntesis del ADNc completa en un periodo de entre 15 y 30 minutos
• Incorpora nucleótidos modificados

Aplicaciones

• RT-PCR en dos pasos
• RT-qPCR en dos pasos
• Síntesis de la primera cadena del ADNc
• Construcción de bibliotecas de ADNc completo
• Etiquetado de ADN
• Extensión de cebadores

También disponible:Kit de síntesis de ADNc de primera cadena Maxima para RT-qPCR

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoStand-alone Enzyme
Temperatura óptima de reacciónDe 50 °C a 55 °C
Cantidad2.000 unidades
Formato de reacciónComponentes separados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaMaxima
Actividad de la ribonucleasa HSí
Condiciones de envíoDry Ice
Tamaño (producto final)Hasta 20 kb
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Concentración200 U/μl
GC-Rich PCR PerformanceHigh
Velocidad de reacción30 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
La transcriptasa inversa Maxima (proporcionada como 2000 unidades a una concentración de 200 U/μl) se suministra con tampón RT 5X (250 mM de Tris-HCl [pH 8,3 a 25 °C], 375 mM de KCl, 15 mM de MgCl2, 50 mM de DTT).
Almacenar a - 20 °C.

Preguntas frecuentes

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H-minus RT or Maxima H-minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H-minus RTs for template-independent addition of C nucleotides.

Do Thermo Scientific reverse transcriptases (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT, and Maxima H-minus RT) possess terminal deoxynucleotidyl (TdT) activity?

All Thermo Scientific reverse transcriptases possess intrinsic TdT activity although at varying degrees depending upon the reaction conditions. For addition of template-independent C nucleotides (as for SMART and RACE experiments), this specific TdT activity can be induced by Mn2+. We would recommend Maxima H- or RevertAid H- minus RTs for this purpose.

Is it preferable to use elevated temperature in the RT reaction when using Maxima reverse transcriptases?

cDNA synthesis at higher temperatures ensures successful transcription of RNA with high levels of secondary structure, reducing issues of primer access to template. Therefore, we do recommend to use RT enzymes with high thermostability, e.g. Maxima and Maxima H Minus Reverse Transcriptases, which provide higher yields of full-length cDNA, better sensitivity, and successful transcription of GC-rich templates.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

For reverse transcription, how important is the quality of RNA template?

RNA purity and integrity are essential for synthesis and quantification of cDNA. Always assess the integrity of RNA prior to cDNA synthesis. Use freshly prepared RNA. Multiple freeze/thaw cycles of the RNA sample and synthesized cDNA is not recommended. Avoid RNase contamination and discard low quality RNA.

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