Mutation Generation System Kit

Los productos de transposón Thermo Scientific se basan en la maquinaria de transposición del bacteriófago Mu. Durante la fase lítica del ciclo vital del fago, la maquinaria replica su genoma transponiendo repetidamente dentro del genoma del huésped. La reacción de transposición de Mu ha sido modificada en una reacción in vitro catalizada por una sola enzima, la transposasa MuA. En este sistema, una reacción in vitro es capaz de generar más de un millón de clones de inserción de transposón.

El sistema de generación de mutaciones (MGS Kit) y el sistema Stop Generation (STOP Kit) se desarrollaron para el análisis funcional de proteínas. Estas nuevas herramientas de transposón permiten la creación de bibliotecas saturadas de proteínas mutadas en una sola reacción con menos tiempo de intervención que cualquier otro método. La ubicación de la inserción de transposón en cada clon mutado se puede mapear mediante PCR o secuenciación. Con los kits MGS y STOP, miles de clones mutados están listos para estudios de expresión en solo de 2 a 3 días.

El MGS Kit contiene el conjunto completo de reactivos para la mutagénesis de exploración enlazadora basada en transposón de cualquier proteína objetivo. Los MGS Entranceposons están diseñados para realizar cambios sutiles en la estructura de una proteína objetivo mediante la inserción de 15 bp en el marco de los linkers en todo el gen objetivo correspondiente. Esta inserción en el marco permite la conservación de secuencias de flujo descendente.

Los Entranceposons de STOPKit contienen codones de parada traslacionales en los tres marcos de lectura dentro de la parte terminal de la secuencia de transposón. La modificación patentada del sistema Stop Generation permite generar una biblioteca de deleción C-terminal saturada a partir de prácticamente cualquier proteína objetivo con una adición máxima de tres aminoácidos.

Características:

• Eficiente: crea bibliotecas de inserción saturadas para secuenciación y análisis de proteínas en una sola reacción
• Rápido: reduce el tiempo de intervención en comparación con los métodos convencionales
• Aleatorio: elimina la preferencia de sitio de destino o el punto directo de inserción

Aplicaciones

STOP Kit genera proteínas truncadas para ensayos funcionales de:

• Enzimas
• receptores
• proteínas estructurales, etc.

MGS Kit genera al azar quince inserciones in vitro de aire de base en cualquier ADN objetivo para:

• Generación rápida de bibliotecas de inserción de cinco aminoácidos en el marco de cualquier proteína para análisis funcionales
• Mutagénesis rápida y aleatoria de promotores clonados y otras regiones de ADN reguladoras
• Inserción aleatoria de un sitio de enzimas de restricción NotI en cualquier clon de ADN objetivo

Ventajas
MGS Kit

• Miles de clones de inserción diferentes desde una sola reacción
• Genera inserciones aleatorias de cinco aminoácidos en los tres marcos de lectura
• Inserciones cortas en el marco; sin codones de parada
• Flexibilidad en el mapeo de mutantes de interés: las mutaciones son fácilmente mapeadas por NotI o PCR
• Más rápido y eficaz que la mutagénesis de barrido de enlaces
• STOP Kit

• Biblioteca saturada de proteínas truncadas de una sola reacción en dos días
• Codón STOP traslacional en los tres marcos de lectura
• La secuencia de ADN objetivo puede ser desconocida
• Más rápido y eficaz que los métodos tradicionales
• No se requieren cebadores específicos

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