Los ensayos celulares LanthaScreen™ GFP permiten el análisis de modificaciones postraslacionales para un número de proteínas objetivo en un contexto de células vivas. La vía PI3K⁄AKT media señales para el crecimiento celular, la supervivencia celular, la transcripción, la traslación y el consumo de glucosa. Debido a la complejidad de esta cascada de señalización, especialmente cuando se aplica a la regulación de la diana de rapamicina mamífera (mTOR), los métodos basados en células son fundamentales para la identificación adecuada de los mediadores de moléculas pequeñas de esta vía. La importancia de mTOR como cinasa se ha subrayado recientemente mediante la identificación de dos complejos multiméricos distintos dentro de la célula: mTORC1 (incluye raptor y es sensible a la rapamicina) y mTORC2 (incluye rictor y es insensible a la exposición aguda a la rapamicina). Se ha demostrado que mTORC2 fosforila y que hay AKT en el residuo Ser473 para la activación completa de esta cinasa de prosupervivencia. LanthaScreenTM AKT HEK293E es una línea celular humana que expresa constitutivamente las proteínas de fusión GFP-AKT. Esta diana cinasa se introdujo mediante transfección de lípidos y estas células son una población clónica aislada por FACS utilizando fluorescencia de GFP como marcador de clasificación y blasticidina para mantener las células en selección. Utilizando esta línea celular, se desarrolló un inmunoensayo homogéneo con una lectura de FRET resuelta en el tiempo (TR-FRET) en la que se detecta la fosforilación inducida por insulina de Ser473 en GFP-AKT en lisados celulares utilizando un anticuerpo específico de fósforo marcado con terbio. Esta línea celular se ha validado con diferentes estímulos⁄inhibidores y muestra los valores correctos de EC50⁄IC50. Además, este ensayo se ha optimizado para el rendimiento en condiciones experimentales variables (incluyendo la densidad de placas celulares, el tiempo de estimulación agonista, la tolerancia a DMSO y el tiempo de desarrollo del ensayo) y muestra excelentes datos estadísticos (Z' > 0,6) y una buena señal de fondo.