Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid H Minus
Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid H Minus
Thermo Scientific™

Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid H Minus

El kit se síntesis de la primera cadena de ADNc Thermo Scientific RevertAid H Minus es un sistema completo paraMás información
Have Questions?
Cambiar vistabuttonViewtableView
Número de catálogoN.º de reacciones
K163120 reacciones
K1632100 reacciones
Número de catálogo K1631
Precio (CLP)
158.514
Each
Añadir al carro de la compra
N.º de reacciones:
20 reacciones
Pedido a granel o personalizado
Precio (CLP)
158.514
Each
Añadir al carro de la compra
El kit se síntesis de la primera cadena de ADNc Thermo Scientific RevertAid H Minus es un sistema completo para la síntesis eficaz de primera cadena del ADNc sobre moldes de ARN. El kit incluye la transcriptasa inversa RevertAid H Minus, con una mutación puntual que elimina completamente la actividad de ARNasa H. Por lo tanto, no degrada el ARN en híbridos ARN-ADN durante la síntesis de la primera cadena de ADNc.

Aspectos destacados

• Gran producción de ADN complementario de primera cadena completa de hasta 13 kb
• Mayor intervalo de temperatura de reacción, de 42 a 55 °C
• Suministrado con inhibidor de ARNasa RiboLock recombinante
• Kit completo: cebadores oligo(dT)18 y hexámeros aleatorios incluidos con el kit

Aplicaciones

• Síntesis de la primera cadena de ADNc para RT-PCR y RT-PCR en tiempo real
• Construcción de bibliotecas de ADNc de longitud completa
• Síntesis de ARN antisentido

Características adicionales

El inhibidor de ARNasa RiboLock recombinante que se suministra con el kit protege con eficacia el molde de ARN de la degradación. Es totalmente compatible con la reacción de transcripción inversa, ya que mantiene la actividad a temperaturas de hasta 55 °C. El kit se suministra tanto con cebadores oligo(dT)18 como con hexámeros aleatorios. El primer oligo(dT)18 se recuece de forma selectiva con la cola poli(A) del ARNm. Los cebadores hexaméricos aleatorios no requieren la presencia de la cola poli(A), por lo que se pueden emplear para la transcripción de las regiones de extremo 5’ del ARNm o la síntesis de especies de ADNc usando ARN sin la cola poli(A) (p. ej., microARN). También pueden emplearse con el kit primers específicos de genes. La primera cadena de ADNc puede emplearse directamente como moldes en PCR, en PCR en tiempo real o en síntesis de segunda cadena de ADNc.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoKit
N.º de reacciones20 reacciones
Temperatura óptima de reacciónDe 42 °C a 45 °C
Cantidad20 reactions
Formato de reacciónComponentes separados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaRevertAid H Minus
Actividad de la ribonucleasa HReducido
Condiciones de envíoDry Ice
Tamaño (producto final)Hasta 13 kb
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Para utilizar con (aplicación)Real Time PCR (qPCR), RT-PCR
Velocidad de reacción60 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid H Minus contiene:
• Transcriptasa inversa sin actividad de ARNasa H RevertAid,
• Inhibidor de ARNasa RiboLock
• Tampón de reacción 5X
• Mezclas de dNTP
• Cebador de oligo(dT)18
• Cebador hexamérico aleatorio
• ARN de control
• Cebadores de control
• Agua libre de nucleasas

Almacénese a -20 °C.

Preguntas frecuentes

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H-minus RT or Maxima H-minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H-minus RTs for template-independent addition of C nucleotides.

Do Thermo Scientific reverse transcriptases (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT, and Maxima H-minus RT) possess terminal deoxynucleotidyl (TdT) activity?

All Thermo Scientific reverse transcriptases possess intrinsic TdT activity although at varying degrees depending upon the reaction conditions. For addition of template-independent C nucleotides (as for SMART and RACE experiments), this specific TdT activity can be induced by Mn2+. We would recommend Maxima H- or RevertAid H- minus RTs for this purpose.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

For reverse transcription, how important is the quality of RNA template?

RNA purity and integrity are essential for synthesis and quantification of cDNA. Always assess the integrity of RNA prior to cDNA synthesis. Use freshly prepared RNA. Multiple freeze/thaw cycles of the RNA sample and synthesized cDNA is not recommended. Avoid RNase contamination and discard low quality RNA.

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H Minus RT or Maxima H Minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H Minus RTs for template-independent addition of C nucleotides. In contrast, reverse transcriptases with intrinsic RNase H activity are often favored in 1-step RT-qPCR applications.

View all Kit de síntesis de la primera cadena de ADNc RevertAid H Minus FAQs