El sistema de expresión pET Champion™ produce proteínas al más alto nivel en E. coli. Durante la expresión, la proteína de interés puede alcanzar niveles superiores al 50 por ciento de proteína celular total durante la expresión Basada en vectores de expresión T7 originalmente desarrollados por Studier y sus compañeros (1-3), la expresión de alto nivel se logra porque la ARN polimerasa T7 es más procesiva que la ARN polimerasa de E. coli nativa y se dedica a la transcripción de genes de interés La producción de proteínas se mejora aún más en el sistema por la cepa de expresión BL21 Star™ E. coli, que mejora significativamente la estabilidad de las transcripciones de ARNm y aumenta la expresión de proteínas hasta diez veces.

™ La clonación TOPO direccional simplificada y eficaz permite introducir rápidamente un vector de expresión pET Champion™. Estos kits presentan vectores de expresión de Champion™ pET linealizados activados por topoisomerasa I para la clonación direccional en cinco minutos La tecnología de clonación TOPO™ direccional facilita la expresión porque:

• Una enzima de corrección se utiliza para la PCR, lo que produce menos errores en los genes clonados
• Más del 90 % de los clones están en la orientación correcta para la expresión génica, lo que reduce el tiempo dedicado a la detección de colonias

Están disponibles siete vectores de expresión TOPO™ direccionales pET Champion™ (Figura 1 y Tabla 1): Cada vector porta un promotor T7lac para una expresión de alto nivel. Están disponibles las opciones flexibles para simplificar la detección de proteínas, dividir las etiquetas de purificación, seleccionar los clones portadores de plásmidos y/o mejorar las producciones de proteínas.
Con los vectores TOPO direccionales pET™ Champion™ puede obtener el nivel más alto de producción de proteínas. La Figura 2 muestra la expresión de los vectores TOPO™ direccionales pET Champion™ del gen lacZ. La Figura 3 muestra una división eficaz mediante la proteasa TEV de la etiqueta N-terminal de una proteína de fusión de βgalactosidasa expresada a partir de pET151/D-TOPO™.