TA Cloning™ Kit, with pCR™2.1 Vector, without competent cells
TA Cloning™ Kit, with pCR™2.1 Vector, without competent cells
Invitrogen™

TA Cloning™ Kit, with pCR™2.1 Vector, without competent cells

El kit TA Cloning™ con vector pCR™2.1 proporciona una estrategia de clonación rápida y de un paso para insertar directamenteMás información
Have Questions?
Cambiar vistabuttonViewtableView
Número de catálogoN.º de reacciones
K20202020 reacciones
K20204040 reacciones
Número de catálogo K202020
Precio (CLP)
385.149
Each
Añadir al carro de la compra
N.º de reacciones:
20 reacciones
Precio (CLP)
385.149
Each
Añadir al carro de la compra
El kit TA Cloning™ con vector pCR™2.1 proporciona una estrategia de clonación rápida y de un paso para insertar directamente un producto de PCR amplificada con Taq en un vector plasmídico. El kit TA Cloning™ usa el vector de clonación pCR™2.1 y ligasa de ADN T4 ExpressLink™ para generar un producto de ligadura en un paso de ligadura de quince minutos a temperatura ambiente. Las reacciones suelen producir > 80 % de recombinantes que contienen insertos.

Características del kit TA Cloning™ con vector 2.1 pCR™:
Rápido y cómodo: ligación de 15 minutos a temperatura ambiente
Eficaz: detección azul/blanco y > 80 % de los clones con inserto adecuado
Flexible: elección de resistencia a kanamicina o ampicilina para la selección flexible de antibióticos
Sin complicaciones: elimina cualquier modificación enzimática del producto de PCR
Optimizado: no requiere el uso de primers de PCR que contengan sitios de restricción

El vector pCR™2.1 proporciona:
• Salientes 3'-T para la ligación directa de productos de PCR amplificados con Taq
• Promotor T7 para transcripción y secuenciación de ARN in vitro
• Un poliligador versátil con sitios EcoR I flanqueados para facilitar la escisión de insertos
• Sitios de primer directo e inverso M13 para secuenciación

Cómo funciona TA Cloning™
La polimerasa Taq tiene una actividad independiente de plantilla que añade una sola desoxiadenosina (A) a los extremos 3' de los productos PCR. El vector linealizado suministrado en este kit tiene residuos de una sola desoxiadenosina 3' (T). Esto permite a los insertos de PCR ligar eficazmente con el vector.

Configuraciones del kit
El kit TA Cloning™ se ofrece en una variedad de configuraciones: sin células competentes (K2020-20 y K2020-40), con E. coli competente químicamente One Shot™ INVF' (K2000-01 y K2000-40), con E. coli competente químicamente One Shot™ TOP10F' (K2030-01 y K2030-40) y con E. coli competente químicamente One Shot™ TOP10 (K2040-01 y K2040-40) en tamaños de kit de 20 y 40 reacciones.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Cepa bacteriana o de levaduraNo incluida
Método de clonaciónTA Cloning
Para utilizar con (aplicación)Clonación PCR
N.º de reacciones20 reacciones
Línea de productosTA Cloning
Tipo de productoKit de clonación
PromotorT7
Cantidad20 reactions
VectorpCR2.1
FormatoKit
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Los kits TA Cloning™ contienen el vector pCR™2.1 linealizado, la ligasa de ADN T4 ExpressLink™, el tampón de ligación de ADN T4 5X ExpressLink™, dNTPs, el tampón de PCR 10X, agua esterilizada y controles.

Almacene todos los componentes a - 20 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente.

Preguntas frecuentes

How do you recommend that I prepare my DNA for successful electroporation of E. coli?

For best results, DNA used in electroporation must have a very low ionic strength and a high resistance. A high-salt DNA sample may be purified by either ethanol precipitation or dialysis.

The following suggested protocols are for ligation reactions of 20ul. The volumes may be adjusted to suit the amount being prepared.

Purifying DNA by Precipitation: Add 5 to 10 ug of tRNA to a 20ul ligation reaction. Adjust the solution to 2.5 M in ammonium acetate using a 7.5 M ammonium acetate stock solution. Mix well. Add two volumes of 100 % ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at 4C. Remove the supernatant with a micropipet. Wash the pellet with 60ul of 70% ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at room temperature. Remove the supernatant with a micropipet. Air dry the pellet. Resuspend the DNA in 0.5X TE buffer [5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (pH 7.5)] to a concentration of 10 ng/ul of DNA. Use 1 ul per transformation of 20 ul of cell suspension.

Purifying DNA by Microdialysis: Float a Millipore filter, type VS 0.025 um, on a pool of 0.5X TE buffer (or 10% glycerol) in a small plastic container. Place 20ul of the DNA solution as a drop on top of the filter. Incubate at room temperature for several hours. Withdraw the DNA drop from the filter and place it in a polypropylene microcentrifuge tube. Use 1ul of this DNA for each electrotransformation reaction.

When should DMSO, formamide, glycerol and other cosolvents be used in PCR?

Cosolvents may be used when there is a failure of amplification, either because the template contains stable hairpin-loops or the region of amplification is GC-rich. Keep in mind that all of these cosolvents have the effect of lowering enzyme activity, which will decrease amplification yield. For more information see P Landre et al (1995). The use of co-solvents to enhance amplification by the polymerase chain reaction. In: PCR Strategies, edited by MA Innis, DH Gelfand, JJ Sninsky. Academic Press, San Diego, CA, pp. 3-16.

Additionally, when amplifying very long PCR fragments (greater than 5 kb) the use of cosolvents is often recommended to help compensate for the increased melting temperature of these fragments.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.