pHrodo™ Green E. coli BioParticles™ Phagocytosis Kit for Flow Cytometry
pHrodo&trade; Green <i>E. coli</i> BioParticles&trade; Phagocytosis Kit for Flow Cytometry
Invitrogen™

pHrodo™ Green E. coli BioParticles™ Phagocytosis Kit for Flow Cytometry

El kit de fagocitosis pHrodo™ Green E. coli BioParticles™ para citometría de flujo permite detectar la actividad fagocítica en muestrasMás información
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Número de catálogoCantidad
P353811 kit
Número de catálogo P35381
Precio (CLP)
1.452.434
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Cantidad:
1 kit
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El kit de fagocitosis pHrodo™ Green E. coli BioParticles™ para citometría de flujo permite detectar la actividad fagocítica en muestras de sangre completa y líneas celulares vivas mediante la citometría de flujo. El kit incluye todos los reactivos necesarios para evaluar la ingestión de partículas y la lisis de eritrocitos. En el kit se proporcionan suficientes reactivos para realizar aproximadamente 100 ensayos con 100 µl de sangre completa por ensayo.

Consulte una guía de selección para todos los indicadores de pHrodo utilizados en la obtención de imágenes, citometrías de flujo y ensayos de microplacas.

El ensayo con pHrodo™ Green E. coli BioParticles™ proporciona una detección sensible sin necesidad de desactivar reactivos ni realizar pasos de lavado adicionales, lo que ayuda a ahorrar tiempo y a minimizar la incertidumbre de si las señales de partículas proceden de partículas internalizadas.

El kit de fagocitosis pHrodo™ Green E. coli BioParticles™ es:

• Específico: colorante fluorogénico sensible al pH para la detección de fagocitosis
• Rápido y reproducible: no es necesario llevar a cabo un lavado ni aplicar colorantes de desactivación
• Flexible: multiplex con reactivos excitados mediante otras líneas de láser
• Compatible: multiplex con reactivos estándar y etiquetadores de CD

Cómo funciona
Los conjugados pHrodo™ Green E. coli BioParticles™ son E. coli inactivados sin opsonizar y que funcionan como partículas fluorogénicas altamente sensibles para la detección de la ingestión fagocítica. El sistema exclusivo basado en colorantes pHrodo™ mide la actividad fagocítica basada en la acidificación de las partículas a medida que se ingieren, eliminando los pasos de lavado y absorción que son necesarios con indicadores no fluorogénicos de captación bacteriana.

El colorante pHrodo™ Green
El nuevo colorante pHrodo™ Green patentado de por Molecular Probes™, sensible al pH, no es fluorescente en pH neutro, pero se vuelve verde brillante con la acidificación. Puesto que es tanto fluorogénico como sensible al pH, el colorante pHrodo™ Green puede usarse como sensor específico de la actividad fagocítica, ya que la acidificación del fagosoma después de la fagocitosis se detecta mediante la fluorescencia verde. Por lo tanto, es una herramienta ideal para estudiar la fagocitosis y su regulación a través de fármacos o factores ambientales. El fluoróforo se excita fácilmente con el láser de ion-argón de 488 nm y la emisión de fluorescencia se puede recoger con un filtro BP estándar de 530/30 nm en la mayoría de los citómetros de flujo por lo que es fácilmente multiplexable con reactivos utilizados en otros láseres.

Rápido y reproducible
No es necesario seguir los pasos de lavado ni aplicar colorantes de desactivación, ya que el colorante pHrodo™ Green no es fluorescente fuera de la célula, lo que hace que el protocolo de tinción sea sencillo y rápido. La eliminación de los pasos de lavado y de la desactivación de la tinción también mejora la reproducibilidad de los ensayos, especialmente en aquellos basados en lectores de placas.

Uso con bacterias
El análisis de la fagocitosis por bacterias grampositivas o gramnegativas se logra fácilmente usando los conjugados prefabricados de pHrodo™ Green BioParticles™. Utilice conjugados de pHrodo™ Green BioParticles™ listos para usar para el análisis práctico de la fagocitosis de bacterias grampositivas o gramnegativas, o la forma de éster pHrodo™ Green STP reactivo a la amina para el etiquetado de los microorganismos o proteínas que desee.

Indicadores de pHrodo™ para fagocitosis
El kit de fagocitosis pHrodo™ Green E. coli BioParticles™ forma parte de un amplio catálogo de reactivos para la medición de la fagocitosis. Los científicos pueden utilizar una variedad de reactivos pHrodo™ en lectores de placas, imágenes de microscopía de fluorescencia y citometría de flujo.

Información adicional sobre pHrodo™ Productos verdes, productos pHrodo™ Red y otros indicadores pHrodo™ para la fagocitosis.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Método de detecciónFluorescente
Tipo de colorantepHrodo™ Green
FormatoTubos, portaobjetos
Cantidad1 kit
Condiciones de envíoHielo húmedo
EspecieE. coli
Emission509⁄533
Para utilizar con (equipo)Citómetro de flujo
Línea de productospHrodo
Tipo de productoKit de fagocitosis
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Contiene tampón de lisis (10 ml), tampón B (200 ml), tampón de lavado (200 ml) y pHrodo™ Green E. coli BioParticles™ (5 viales, producto liofilizado). Almacenar en el refrigerador (2–8 °C) y proteger de la luz. No la congele.

Preguntas frecuentes

Are the Invitrogen BioParticles products sterile?

While the bacteria have been attenuated with formaldehyde and alcohol desiccation, the BioParticles products are not considered sterile, and we do not recommend incubation of more than 4 hours. This applies to all of our dye-labeled (pHrodo, Alexa Fluor, etc.) and unlabeled BioParticles products.

How should I store the pHrodo BioParticles included within pHrodo BioParticles Phagocytosis kits for flow cytometry?

The pHrodo BioParticles are supplied within the kits in lyophilized form. We recommend storing the pHrodo BioParticles vial(s) at 2-8 degrees C, desiccated and protected from light. Once reconstituted, the pHrodo BioParticles can be stored at 2-8 degrees C for several weeks, as long as sodium azide is added to a final concentration of 2 mM. If no sodium azide is added, the cell suspension needs to be used right away or on the same day to avoid contamination.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

What is the type of bond that attaches the dyes to the BioParticles probes?

We use amine-reactive dyes to covalently attach fluorescent dyes to all of our BioParticles probes such as the Escherichia coli (K-12 strain) BioParticles probes, Staphylococcus aureus (Wood strain without protein A) BioParticles, and the Zymosan A (S. cerevisiae) BioParticles probes.

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What cellular processes can be analyzed with a flow cytometer?

-Calcium flux: Each of the Oregon Green calcium indicators binds intracellular calcium with increasing affinity, providing a sensitivity range to match many applications. Oregon Green probes emit green fluorescence at resting levels of Ca2+ and increase their fluorescence intensity 14-fold with increasing Ca2+ concentration. The cell-permeant formulation (Cat. No. O6807) can be loaded in cell media and is compatible with flow cytometry.
-Rhodamine-based calcium indicators comprise a range of probes for large or small changes in Ca2+ concentration. They exhibit a 50-fold increase in fluorescence upon calcium binding and offer a range of wavelengths that can be used in conjunction with GFP or green-fluorescent dyes for multiplexing. Rhod-2, AM (Cat. No. R1245MP), in particular, localizes to mitochondria and can be used with flow cytometry.
-Membrane potential: A distinctive feature of the early stages of apoptosis is the disruption of the mitochondria, including changes in membrane and redox potential. We offer a range of products specifically designed to assay mitochondrial membrane potential in live cells by flow cytometry, with minimal disruption of cellular function. The MitoProbe family of mitochondrial stains (Cat. Nos. M34150, M34151, and M34152) provide quick, easy, and reliable flow cytometric detection of the loss of mitochondrial membrane potential that occurs during apoptosis. MitoTracker dyes (Cat. Nos. M7510 and M7512) are membrane potential-dependent probes for staining mitochondria in live cells. The staining pattern of MitoTracker dyes is retained throughout subsequent flow cytometry immunocytochemistry, DNA end labeling, in situ hybridization, or counterstaining steps. The Mitochondrial Permeability Transition Pore Assay (Cat. No. M34153) provides a more direct method of measuring mitochondrial permeability transition pore opening than assays relying on mitochondrial membrane potential alone. The mitochondrial permeability transition pore (MPTP) is a non-specific channel formed by components from the inner and outer mitochondrial membranes, and appears to be involved in the release of mitochondrial components during cell death.
-Phagocytosis: In phagocytosis, cells internalize particulate matter such as microorganisms, and this process is important for immune responses and during the clearance of apoptotic cells. Probes for studying phagocytosis include BioParticles indicators—bacteria and yeast labeled with fluorescent dyes.
-Tracking phagocytosis using a quench/wash-based assay can report on simple uptake, or a pH indicator can be used to monitor stages in the pathway. We have no-wash assays labeled with pHrodo Red or Green (Cat. Nos. A10010, P35361, P35364, P35365, P35366, and P35367) and no-wash assays for whole blood (Cat. Nos. A10025, A10026, P35381, and P35382), all suitable for flow cytometry.
-pH changes: Sensitive pH determinations can be made in a physiological range using either fluorescent intensity or ratiometric measurements. pHrodo dyes (Cat. Nos. P35373 and P35372) provide signal intensity modulation from pH 2 to pH 9 and with a choice of fluorescent wavelengths. Tracking internalization of fluorescent dextran is a routine method for analyzing pH changes in cellular compartments. Dextran conjugates of pHrodo dyes (Cat. Nos. P35368 and P10361) provide the most complete solution by allowing discrimination of vesicles from early endosomes to lysosomes, with no quench or wash required.
-Reactive oxygen species: Cells that are environmentally stressed usually contain greatly increased levels of reactive oxygen species (ROS). CellROX reagents are fluorogenic probes developed for the detection and quantitation of ROS in live cells. These cell-permeant reagents are non-fluorescent or very weakly fluorescent in the reduced state; however, when oxidized, they become brightly fluorescent and remain localized within the cell. We offer CellROX Green (Cat. No. C10492), CellROX Orange (Cat. No. C10493), and CellROX Deep Red (Cat. No. C10491) Assay Kits validated for flow cytometry.

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