ProQuest™ Two-Hybrid System with Gateway™ Technology
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ProQuest™ Two-Hybrid System with Gateway™ Technology

El sistema ProQuest™ Two-Hybrid con tecnología Gateway™ es un sistema basado en levaduras in vivo para identificar interacciones entre dosMás información
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Número de catálogoCantidad
PQ10001011 kit
Número de catálogo PQ1000101
Precio (CLP)
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Cantidad:
1 kit
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El sistema ProQuest™ Two-Hybrid con tecnología Gateway™ es un sistema basado en levaduras in vivo para identificar interacciones entre dos proteínas. Esta interacción reconstituye un factor de transcripción funcional que activa los genes indicadores integrados de forma cromosómica en los que el crecimiento de células en medios selectivos supervisa la activación transcripcional
El sistema ProQuest™ incluye:
• Tecnología Gateway™ para permitir la generación rápida y fácil de construcciones de cebo y presas, y facilitar la aplicación posterior
• Vectores de DBD (dominio de unión de ADN) y AD (dominio de activación) con bajo número de copias (ARS/CEN) para controlar la sobreexpresión y aumentar la reproducibilidad
• Tres diferentes genes indicadores (HIS3, URA3 y lacZ) con regiones promotoras independientes para eliminar rápidamente falsos positivos. El gen indicador URA3 permite la selección tanto positiva como negativa, permitiendo técnicas avanzadas de dos híbridos, como la inversa de dos híbridos.

• Un conjunto de interacciones de control basadas en Gateway™ de fuerte a débil para evaluar los resultados y evaluar la fuerza de la interacción que se está probando
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
ensayoEnsayo de dos híbridos
Sistema de expresiónLevadura
Tipo de productoSistema híbrido doble
Cantidad1 kit
Gen marcadorBeta-Gal (lacZ), HIS3, URA3
Línea de productosGateway, ProQuest
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El sistema ProQuest™ Two-Hybrid incluye vectores de expresión de levaduras pDEST™32, pDEST™22 y pEXP-AD502 para la generación de proteínas de fusión de dominio de unión de ADN GAL4 y dominio de activación de GAL4, y la mezcla de enzimas LR Clonase™ II, una reserva de glicerol de la cepa de levadura MaV203, así como controles positivos y negativos para el ensayo de dos híbridos. Almacene los componentes del kit a -80 °C. Se garantiza la estabilidad durante seis meses si se almacena correctamente.

Preguntas frecuentes

How large of a PCR product can I recombine with a pDONR vector via BP cloning? Does the same apply for TOPO-adapted Entry vectors?

There is no theoretical limit to insert size for a BP reaction with a pDONR vector. Maximum size tested in-house is 12 kb. TOPO vectors are more sensitive to insert size and 3-5 kb is the upper limit for decent cloning efficiency.

How should I clean up my attB-PCR product?

After generating your attB-PCR product, we recommend purifying it to remove PCR buffer, unincorporated dNTPs, attB primers, and any attB primer-dimers. Primers and primer-dimers can recombine efficiently with the Donor vector in the BP reaction and may increase background after transformation into E. coli, whereas leftover PCR buffer may inhibit the BP reaction. Standard PCR product purification protocols using phenol/chloroform extraction followed by ammonium acetate and ethanol or isopropanol precipitation are not recommended for purification of the attB-PCR product as these protocols generally have exclusion limits of less than 100 bp and do not efficiently remove large primer-dimer products. We recommend a PEG purification protocol (see page 17 of the Gateway Technology with Clonase II manual). If you use the above protocol and your attB-PCR product is still not suitably purified, you may further gel-purify the product. We recommend using the PureLink Quick Gel Extraction kit.

I'm trying to propagate my Gateway destination vector and am not seeing any colonies. What should I do?

Check the genotype of the cell strain you are using. Our Gateway destination vectors typically contain a ccdB cassette, which, if uninterrupted, will inhibit E. coli growth. Therefore, un-cloned vectors should be propagated in a ccdB survival cell strain, such as our ccdB Survival 2 T1R competent cells.

Why does my prestained standard give different molecular weights for different types of gels?

Protein gels vary in pH. Each of the proteins in the standard has a dye molecule attached to it, and the charge on these dye molecules can change depending on the pH of the gel. This change in charge will affect the migration of the protein on the gel.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

Is the ProQuest Two-Hybrid System suitable for protein-protein interaction studies with membrane proteins?

The ProQuest Two-Hybrid System is not suitable for proteins containing membrane spanning domains. Protein interaction and activation of transcription of the reporter genes depends on the proteins localizing to the nucleus. You can remove membrane-spanning regions or include only cytosolic or extracelluar domains of membrane bound protein in the bait or prey constructs.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

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