Image-iT™ Fixative Solutions

Las soluciones de fijación Image-iT son soluciones de fijación listas para su uso que se proporcionan en varios formatos para satisfacer una variedad de necesidades de investigación. Son ideales para su uso con proteínas fluorescentes, como GFP y RFP, y otros fluoróforos de colorante pequeños. Ya no es necesario mezclar polvos fijadores tóxicos o dilución de soluciones concentradas con pH no óptimo.  Solo tiene que añadir estas soluciones fijadoras a las células/tejido e incubar durante 10-15 minutos a temperatura ambiente. Son ideales para su uso con cualquier método de detección basado en anticuerpos, como inmunocitoquímica (ICC), inmunofluorescencia (IF) e inmunohistoquímica (IHC).

Las características de las soluciones de fijación de Image-iT incluyen:
• Listos para su uso
• Fijadores de grado de imagen de alta pureza con mínimos artefactos de señal de fondo
• Sin metanol
• Optimizados para el marcado secundario de anticuerpos, tinción de colorante de células fijas y IHC colorimétrico

Soluciones de fijación de paraformaldehído o formaldehído al 4 %
Las formas más comunes de formaldehído y paraformaldehído al 4 % son fijadores usados​para inmunocitoquímica (ICC), inmunofluorescencia (IF) e inmunohistoquímica (IHC).  El paraformaldehído Image-IT™ al 4 % en tampón de fosfato de 0,1 M con pH de 7,4 (n.º de cat. I28800) se suministra en paquetes de diez viales con 10 ml cada uno. El formaldehído Image-iT™ al 4 % en PBS se suministra en un tamaño de 20 ml (n.º de cat. FB002) o tamaño de 5 x 20 ml (n.º de cat. R37814). El paraformaldehído/formaldehído al 4 % en tampón de fosfato de 0,1 M tiene ∼ 300 mOsm menos de osmolaridad que en PBS, lo que ayuda a mantener la morfología celular antes de que el fijador tenga la oportunidad de fijar los compartimentos celulares internos. Para paraformaldehído/formaldehído en PBS o tampón de fosfato, simplemente agregue el fijador a las células e incube de 5 a 10 minutos a temperatura ambiente. Lave las células en PBS después de la incubación y continúe con el paso de bloqueo.

Solución de fijación de paraformaldehído al 3 %, glutaraldehído al 0,35 %
Paraformaldehído al 3 % con glutaraldehído al 0,35 % es una solución lista para su uso que se suministra en tampón de cacodilato sódico de 0,1 M sin metanol. Yuan Qin, et al. (1) encontró que una mezcla de paraformaldehído y glutaraldehído puede preservar la morfología mitocondrial mejor que cualquiera de los dos.

El paraformaldehído es una molécula pequeña que penetra rápidamente en las células / los tejidos, fijando proteínas y otras moléculas en su lugar. El glutaraldehído es una molécula más grande con dos grupos aldehído reactivos que aumentan el potencial de fijación y ayudan a crear largas cadenas de glutaraldehído, generando una matriz. Esta capacidad ayuda a preservar la localización de proteínas en entornos complejos como las mitocondrias.

Para fijar células/tejido, se recomiendan de 5 a 10 minutos de incubación a temperatura ambiente. Con el glutaraldehído, se puede observar una mayor autofluorescencia debido a una mayor presencia de grupos de aldehído reactivos. Para ayudar a reducir esta autofluorescencia, se recomiendan aproximadamente siete minutos de incubación con glicina de 0,1 M o borohidruro de sodio recién preparado al 0,1 % (p/v) después de la fijación, pero antes del bloqueo.

Solución de fijación de glicoxal al 3 %
La solución de fijación de glicoxal al 3 % es una solución de fijación lista para su uso que se suministra en dos partes.  Simplemente mezcle las dos partes 1:1, ajuste el pH a 4,5 con NaOH y úselo. El glioxal es una molécula más pequeña que el formaldehído o el glutaraldehído. Penetra rápidamente en las células/tejidos, fijando las proteínas y preservando la morfología celular mejor que el formaldehído (2). La solución de fijación de glioxal al 3 % incluye dos frascos: Solución A y solución B, que contienen etanol absoluto, solución de glioxal, ácido acético y agua. Añada la misma cantidad de solución A a la solución B en un vial vacío, agite las dos soluciones y lleve a un pH de 4,5 con la adición de 1 M de NaOH. Esta solución debe usarse inmediatamente una vez mezclada. Para fijar las células/tejidos, incube las células/tejidos a temperatura ambiente durante aproximadamente 10 minutos. Las soluciones sin mezclar (pero usadas) en los frascos son estables y se pueden usar hasta la fecha de vencimiento que figura en la etiqueta.

Referencias
1: Qin Y, Jiang W, Li A, Gao M, Liu H, Gao Y, Tian X, Gong G. The Combination of Paraformaldehyde and Glutaraldehyde Is a Potential Fixative for Mitochondria. Biomolecules. 10 de mayo de 2021; 11(5):711.
2. Richter KN, et al. Glyoxal as an alternative fixative to formaldehyde in immunostaining and super-resolution microscopy. EMBO J. 2018 Jan 4;37(1):139-159.