Flp-In™-3T3 Cell Line

Las líneas celulares Flp-In™ están diseñadas para la generación rápida de líneas celulares estables que expresan una proteína de interés a partir de un vector de expresión Flp-In™. Estas células contienen un solo sitio de FRT integrado de forma estable en un locus genómico activo transcripcionalmente. La integración selectiva del vector de expresión de Flp-In™ garantiza la expresión de alto nivel del gen de interés. Hay seis líneas celulares Flp-In™ disponibles para la generación de líneas celulares estables isogénicas y una línea celular T-REx™ Flp-In™ para la generación de líneas celulares estables reguladas por tetraciclina. Las líneas celulares Flp-In™-CV-1, Flp-In™-293, Flp-In™-BHK, Flp-In™-Jurkat y Flp-In™-3T3 se crearon mediante la transfección de las líneas de células madre con pFRT/lacZeo y la selección de clones estables resistentes a Zeocin™. La línea celular Flp-In™-CHO se creó mediante la transfección de las células CHO con pFRT/lacZeo2 y la selección de clones estables resistentes a Zeocin™. La línea celular Flp-In™ T-REx™-293 contiene pFRT/lacZeo y pcDNA™6/TR (del sistema T-REx™) integrado de forma estable. La cotransfección de las líneas celulares Flp-In™ con un vector de expresión Flp-In™ y el vector de recombinada Flp, pOG44, da como resultado la integración selectiva del vector de expresión en el mismo locus en cada célula, asegurando niveles homogéneos de expresión génica.

Elección de Flp-In™ Combinación de línea celular/vector
Las líneas celulares Flp-In™-CV-1, Flp-In™-293, Flp-In™-CHO y Flp-In™-Jurkat (Figura 1) funcionan bien con los vectores Flp-In™ que expresan un gen de un promotor CMV (pcDNA™5/FRT, pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO™ y pSecTag/FRT/V5-His-TOPO™). Las Flp-In™-BHK y Flp-In™-3T3 tienden a regular el promotor del CMV. Por lo tanto, se recomienda que los vectores Flp-In™ que contengan el promotor EF-1α (pEF5/FRT/V5-DEST™ y pEF5/FRT/V5-D-TOPO™) se usen con estas líneas celulares.