Flp-In™-Jurkat Cell Line

Las líneas celulares Flp-In™ están diseñadas para la generación rápida de líneas celulares estables que expresan una proteína de interésMás información

Número de catálogo	Cantidad
R76207	1 mL

Número de catálogo R76207

Precio (CLP)

3.018.268

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Las líneas celulares Flp-In™ están diseñadas para la generación rápida de líneas celulares estables que expresan una proteína de interés a partir de un vector de expresión Flp-In™. Estas células contienen un solo sitio de FRT integrado de forma estable en un locus genómico activo transcripcionalmente. La integración selectiva del vector de expresión de Flp-In™ garantiza la expresión de alto nivel del gen de interés. Hay seis líneas celulares Flp-In™ disponibles para la generación de líneas celulares estables isogénicas y una línea celular T-REx™ Flp-In™ para la generación de líneas celulares estables reguladas por tetraciclina. Las líneas celulares Flp-In™-CV-1, Flp-In™-293, Flp-In™-BHK, Flp-In™-Jurkat y Flp-In™-3T3 se crearon mediante la transfección de las líneas de células madre con pFRT/lacZeo y la selección de clones estables resistentes a Zeocin™. La línea celular Flp-In™-CHO se creó mediante la transfección de las células CHO con pFRT/lacZeo2 y la selección de clones estables resistentes a Zeocin™. La línea celular Flp-In™ T-REx™-293 contiene pFRT/lacZeo y pcDNA™6/TR (del sistema T-REx™) integrado de forma estable. La cotransfección de las líneas celulares Flp-In™ con un vector de expresión Flp-In™ y el vector de recombinada Flp, pOG44, da como resultado la integración selectiva del vector de expresión en el mismo locus en cada célula, asegurando niveles homogéneos de expresión génica.

Elección de Flp-In™ Combinación de línea celular/vector
Las líneas celulares Flp-In™-CV-1, Flp-In™-293, Flp-In™-CHO y Flp-In™-Jurkat (Figura 1) funcionan bien con los vectores Flp-In™ que expresan un gen de un promotor CMV (pcDNA™5/FRT, pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO™ y pSecTag/FRT/V5-His-TOPO™). Las Flp-In™-BHK y Flp-In™-3T3 tienden a regular el promotor del CMV. Por lo tanto, se recomienda que los vectores Flp-In™ que contengan el promotor EF-1α (pEF5/FRT/V5-DEST™ y pEF5/FRT/V5-D-TOPO™) se usen con estas líneas celulares.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Línea de célulasLínea celular Flp-In™-Jurkat

Cantidad1 mL

EspecieHumano

Línea de productosFlp-In

Etiqueta de proteínapSec

Unit SizeEach

Contenido y almacenamiento

3 x 10⁶ células se suministran congeladas en 1 ml de 90 % de medio completo y 10 % de DMSO. Las células deben almacenarse en nitrógeno líquido. Se garantiza la estabilidad de todas las células durante 6 meses si se almacenan adecuadamente.

Preguntas frecuentes

I have your Flp-In Jurkat cells that I tried to thaw using the protocol suggested in your manual, but got very poor viability. What do you think went wrong?

Flp-In Jurkat cells are a little tricky to handle and are very sensitive to centrifugation. You may try the following protocol to thaw the cells:

- Thaw 1 vial of cells into a T25 flask containing 5-7 mL of fresh medium (without selection). Do not spin down the cells to remove the DMSO at this point, as they are very sensitive to handling (including centrifugation). Typically, there is a lot of debris present upon thaw.
- 24 hours post-thaw, spin down the cells at 900 rpm for 2-3 minutes and resuspend gently into 5 mL of fresh medium. Spinning down the entire volume of cells greatly reduces the amount of debris in the culture.
- At day 5 or 6, it is okay to add the selection. Continue to passage the cells (spinning the cells down) every 2-3 days for a total of 1.5 weeks, each time resuspending back into only 5-7 ml of fresh medium in a T25 flask to build up the cell density. The Jurkat cells are very small and clumpy, and they expand very slowly.
- Attempt to expand the cells into a T75 flask only after about 1.5 weeks.

Is multiple integration of the Flp-In expression construct possible? How do you screen for multiple integrants, and how stable is the Flp-In expression cell line?

In theory, one can get multiple integrations of the Flp-In expression construct—an FRT-specific integration event and a random, second-site integration. However, random integration is a relatively uncommon event. Limiting the amount of DNA in the transfection will reduce the chance of second-site integration. We have transfected 293 cells (lacking the FRT site) with the pcDNA5/FRT vector and have identified one potential second-site integrant after screening over 200 clones. DNA integrations can be detected by Southern blot. A single integrant will display a single band; double: two; triple: three, etc. We have maintained a number of Flp-In expression cell lines for over four months and have not observed any loss of the Flp-In expression construct, whether hygromycin selection was maintained or not.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

What kind of Flp-In T-REx cell lines do you offer?

We offer the Flp-In T-REx system that contains pFRT/lacZeo and pcDNA6/TR stably integrated into HEK 293 cells. This cell line has been functionally tested for its ability to regulate expression.

Citations & References (1)

Citations & References

Abstract

The MLL fusion gene, MLL-AF4, regulates cyclin-dependent kinase inhibitor CDKN1B (p27kip1) expression.

Authors:Xia ZB, Popovic R, Chen J, Theisler C, Stuart T, Santillan DA, Erfurth F, Diaz MO, Zeleznik-Le NJ,

Journal:Proc Natl Acad Sci U S A

PubMed ID:16169901

MLL, involved in many chromosomal translocations associated with acute myeloid and lymphoid leukemia, has >50 known partner genes with which it is able to form in-frame fusions. Characterizing important downstream target genes of MLL and of MLL fusion proteins may provide rational therapeutic strategies for the treatment of MLL-associated leukemia. ... More