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Invitrogen™
pEXP4-DEST Vector Kit
El sistema de expresión en E. coli sin células Expressway™ Tag-On-Demand™ con tecnología Lumio™ permite la cómoda expresión in vitroMás información
| Número de catálogo | Cantidad |
|---|---|
| V96004 | 6 μg |
Número de catálogo V96004
Precio (CLP)
803.144
6 µg
Cantidad:
6 μg
Precio (CLP)
803.144
6 µg
El sistema de expresión en E. coli sin células Expressway™ Tag-On-Demand™ con tecnología Lumio™ permite la cómoda expresión in vitro de proteínas con o sin etiqueta a partir de un único vector, la detección en tiempo real de la síntesis de proteínas y la detección fácil de proteínas en gel. Con este sistema:
• Detecte rápidamente los niveles de expresión de proteína de longitud completa
• Ahorre tiempo y esfuerzo clonando solo una vez para expresar proteína marcada o nativa
• Exprese proteína con etiqueta C-terminal a partir del clon Ultimate™ ORF en un sistema in vitro
El sistema Expressway™ Tag-On-Demand™ incluye un lisado de E. coli especializado derivado de un slyD mutante para la síntesis sin células. Este lisado elimina la unión inespecífica del reactivo de detección Lumio™ Green a la proteína SlyD endógena, proporcionando un fondo óptimo para la detección de proteínas recombinantes.
Funcionamiento
Clone el gen de interés que contenga el codón de parada TAG (ámbar) en el vector pEXP4-DEST proporcionado (figura 1). El vector pEXP4-DEST cuenta con sitios attR para una recombinación Gateway™ eficaz, etiquetas C-terminales Lumio y ™ etiquetas 6xHis para una identificación y purificación simplificadas, y componentes para la síntesis de proteínas sin células. En presencia del ARNt supresor Expressway™ Tag-On-Demand™, no se reconoce el codon TAG y la traducción continúa hasta las etiquetas Lumio y ™ 6xHis. En ausencia del tRNA supresor, se reconoce el codón de parada TAG y se produce proteína nativa (Figura 2). A partir del mismo vector, puede determinar rápidamente el nivel de expresión de la proteína de longitud completa con la etiqueta C-terminal y luego expresar la proteína nativa libre de cualquier efecto adverso que la etiqueta pueda tener en su estructura, actividad o interacciones moleculares.
• Detecte rápidamente los niveles de expresión de proteína de longitud completa
• Ahorre tiempo y esfuerzo clonando solo una vez para expresar proteína marcada o nativa
• Exprese proteína con etiqueta C-terminal a partir del clon Ultimate™ ORF en un sistema in vitro
El sistema Expressway™ Tag-On-Demand™ incluye un lisado de E. coli especializado derivado de un slyD mutante para la síntesis sin células. Este lisado elimina la unión inespecífica del reactivo de detección Lumio™ Green a la proteína SlyD endógena, proporcionando un fondo óptimo para la detección de proteínas recombinantes.
Funcionamiento
Clone el gen de interés que contenga el codón de parada TAG (ámbar) en el vector pEXP4-DEST proporcionado (figura 1). El vector pEXP4-DEST cuenta con sitios attR para una recombinación Gateway™ eficaz, etiquetas C-terminales Lumio y ™ etiquetas 6xHis para una identificación y purificación simplificadas, y componentes para la síntesis de proteínas sin células. En presencia del ARNt supresor Expressway™ Tag-On-Demand™, no se reconoce el codon TAG y la traducción continúa hasta las etiquetas Lumio y ™ 6xHis. En ausencia del tRNA supresor, se reconoce el codón de parada TAG y se produce proteína nativa (Figura 2). A partir del mismo vector, puede determinar rápidamente el nivel de expresión de la proteína de longitud completa con la etiqueta C-terminal y luego expresar la proteína nativa libre de cualquier efecto adverso que la etiqueta pueda tener en su estructura, actividad o interacciones moleculares.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Resistencia bacteriana a los antibióticosAmpicilina (AmpR), Zeocin™ (ZeoR)
Tipo de productoVector de expresión de destino del sistema Gateway
Cantidad6 μg
Agente de selección (eucariótico)Ninguno
VectorpEXP, pDEST
Método de clonaciónGateway
Línea de productosExpressway, Gateway
PromotorT7
Etiqueta de proteínaLumio
Unit Size6 µg
Contenido y almacenamiento
El sistema de expresión en E. coli sin células Expressway™ Tag-on-Demand™ con tecnología Lumio™ incluye el vector pEXP4-DEST (cuando está indicado), plásmido de control de expresión positiva, extracto de E. coli con mutación en slyD Tag-on-Demand™, tampón de reacción de E. coli, ARNt supresor Tag-on-Demand™, metionina, agua destilada sin ADNasa/ARNasa, ARNasa A, mezcla de enzimas T7, tubos de reacción de 2 ml, kit de detección Lumio™ Green y el patrón de proteínas fluorescente Benchmark™. El kit de vector pEXP4-DEST Gateway™ incluye pEXP4-DEST y un plásmido de control. Almacene vectores, reactivo de detección y estándar de proteínas a -20° C. Almacenar todos los demás componentes a -80 °C. Se garantiza la estabilidad durante 6 meses si se almacena correctamente.