CloneJET™ PCR-Klonierungs-Kit mit kompetenten DH10B-Zellen

Dieses Paket enthält das CloneJET PCR Klonierungskit (20 oder 40 Reaktionen) und die DH10B kompetenten Zellen, die für die Verwendung mit dem Kit optimiert sind und mit dem Ligationsprodukt direkt transformiert werden können.

CloneJET PCR Klonierungskit
Das Thermo Scientific CloneJET PCR Klonierungskit ist ein fortschrittliches Positivauswahlsystem für das hocheffiziente Klonen von PCR-Produkten, die mit jeder thermostabilen DNA-Polymerase erzeugt werden. Beliebige andere DNA-Fragmente mit stumpfen oder überhängenden Enden können kloniert werden. Das Kit eignet sich sowohl für phosphorylierte als auch nicht phosphorylierte DNA-Fragmente. Die Ligation in den beiliegenden Vektor zur Positivselektion dauert nur fünf Minuten und führt zu einer Ausbeute von über 99 % rekombinanter Klone. Die mit einem Proofreading-Enzym hergestellten PCR-Produkte mit stumpfen Ende werden direkt in den Klonierungsvektor ligiert.

PCR-Produkte, die mit Non-Proofreading-DNA-Polymerasen oder DNA-Polymerase-Mischungen hergestellt wurden, werden vor der Ligation fünf Minuten lang mit dem im Kit enthaltenen DNA-Blunting-Enzym inkubiert. DH10B kompetenten Zellen sind für die Verwendung mit dem CloneJET PCR Klonierungskit optimiert und können direkt mit dem Ligationsprodukt transformiert werden.

Das CloneJET PCR Klonierungskit enthält den neuen, gebrauchsfertigen Klonierungsvektor pJET1.2/Blunt zur Positivauswahl. Der Vektor enthält ein letales Restriktionsenzymgen, das durch Ligation eines DNA-Inserts in die Klonierungsstelle unterbrochen wird. Dementsprechend können nur Bakterienzellen mit rekombinanten Plasmiden Kolonien bilden. pJET1.2/Blunt-Vektormoleküle nach Ringschluss, die kein Insert vorweisen, exprimieren ein letales Restriktionsenzym, wodurch die E. coli-Wirtszelle nach der Transformation abgetötet wird. Diese Positivselektion beschleunigt drastisch das Kolonie-Screening und vermeidet zusätzliche Kosten für die Blau-Weiß-Selektion.

• Schnell — PCR-Klonierung in nur fünf Minuten
• Höchste Effizienz — > 99 % positive Klone
• Kein Klonierungshintergrund — Vektor zur Positivselektion
• Vielseitig — Ideal für die Klonierung mit stumpfem oder überhängendem Ende
• Wirtschaftlich — Kein kostenintensives Blau-Weiß-Screening

Anwendungsbereich:
• Klonierung von PCR-Produkten mit stumpfem Ende oder 3'-dA-Schwanz bis zu 10 kb
• Klonierung von DNA-Fragmenten, die mit Restriktionsenzymen hergestellt wurden
• Sequenzierung klonierter DNA
• In-vitro- und In-vivo-Transkription klonierter Inserts vom T7-Promoter

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DH10B kompetente Zellen
Thermo Scientific DH10B kompetente Zellen sind hocheffiziente, chemisch kompetente E. coli-Zellen. Der DH10B-Stamm eignet sich zum Klonieren von DNA, die Methylzytosin und Methyladenin enthält, und ermöglicht so effizientes Klonieren sowohl prokaryotischer als auch eukaryotischer genomischer DNA. Diese Zellen sind ideal für den Aufbau von cDNA-Bibliotheken mit Plasmidvektoren. Genotyp: F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG.

• Hohe Transformationseffizienz: > 1x109 KbE/µg pUC19 DNA
• Geeignet für Routine- und Hochdurchsatz-Klonierungsanwendungen
• Im praktischen Format: zwei Reaktionen pro Fläschchenverpackung
• S.O.C.- Auswuchsmedium enthalten

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