EZ-Link™ NHS-Desthiobiotin

NHS-destiobiotina EZ-Link Thermo Scientific es un reactivo de etiquetado de aminas corto, permeable a la membrana, cuyo grupo similar a la biotina es eluíble a partir de la estreptavidina, lo que lo convierte en ideal para el etiquetado y la purificación de proteínas intracelulares.

Características de NHS-destiobiotina EZ-Link:

• Destiobiotina: como análogo de la biotina, permite una fácil elución a partir de la estreptavidina, una característica ideal para aplicaciones de purificación por afinidad
• Etiquetado de proteínas: marque los anticuerpos o las proteínas en muestras purificadas o mezcladas para permitir una alta recuperación en ensayos de extracción con gránulos de estreptavidina
• Membrana permeable: logre un marcado intracelular con células intactas porque el reactivo pequeño y sin carga se difunde fácilmente a través de las membranas celulares
• Aminorreactivo: reacciona con aminas primarias (-NH2), como la cadena lateral de lisinas (K) o el extremo amino de polipéptidos

La NHS-destiobiotina es una variante de la biotina que se activa como un éster de NHS para etiquetar covalentemente aminas primarias (-NH2) de proteínas u otras moléculas con grupos de destiobiotina. La etiqueta de la destiobiotina se une a la estreptavidina y a otras proteínas de unión a la biotina con alta especificidad, pero se eluye fácilmente con condiciones leves (es decir, por desplazamiento competitivo con biotina regular y libre). Como tal, este reactivo es una alternativa útil a la NHS-biotina (n.° de referencia 20217) para las técnicas de avidina-biotina en las que se desea obtener la elución no denaturante de las proteínas etiquetadas. Esta variedad más simple y más pequeña de reactivo de destiobiotina amina no tiene carga y es permeable a la membrana celular; por lo tanto, la NHS-destiobiotina se puede utilizar con células intactas para el etiquetado de proteínas intracelulares.

Destiobiotina vs. biotina
La destiobiotina es un análogo de biotina libre de azufre de un solo anillo que se une a la estreptavidina con una especificidad casi igual pero menos afinidad que la biotina (1/Kd = 10^11 vs. 10^15M, respectivamente)[1-2]. En consecuencia, las proteínas de cebo destiobiotiniladas y sus elementos de interacción pueden eludirse fácilmente y específicamente a partir de la resina de afinidad de estreptavidina utilizando condiciones leves basadas en el desplazamiento competitivo con biotina libre. Para experimentos de ensayos de precipitación con muestras biológicas, esta característica de liberación suave de la destiobiotina también ayuda a minimizar la copurificación de moléculas endógenas biotiniladas, que permanecen ligadas a la estreptavidina tras la elución de los complejos proteicos objetivo con biotina libre. El sistema modificado de afinidad de la avidina-biotina también elimina la necesidad de utilizar condiciones de elución severas que podrían desasociar complejos o dañar la proteína o célula objetivo. Las técnicas basadas en la destiobiotina son ideales cuando se utilizan proteínas nativas o recombinantes que no se expresan con una etiqueta de fusión y cuando se aíslan proteínas capturadas en condiciones nativas, como la focalización de células intactas o proteínas de superficie celular.

Etiquetado con reactivos de NHS de éster:
Los ésteres de N-hidroxisulfosucinimida (NHS) de la biotina son el tipo más popular de reactivo de biotinilación. Las biotinas activadas por NHS reaccionan eficazmente con grupos amino primarios (-NH2) en tampones alcalinos para formar enlaces amida estables. Las proteínas suelen tener varias aminas primarias que están disponibles como objetivos de etiquetado, incluyendo la cadena lateral de residuos de lisina (K) y el extremo N de cada polipéptido. La mayoría de los ésteres del sulfo-NHS son directamente solubles en agua pero no permeables a la membrana. Los ésteres de NHS sencillos son menos solubles en tampones acuosos pero permeables a la membrana.