Papaína inmovilizada (resina de agarosa)

La papaína inmovilizada Thermo Scientific Pierce es una cisteína-endopeptidasa (papaína) que se ha inmovilizado en resina de agarosa en gránulos para permitir la generación y purificación de fragmentos de Fab a partir de anticuerpos.

La papaína es una cisteína-endopeptidasa no específica aislada de látex de papaya que se utiliza en una amplia variedad de aplicaciones. Cuando las moléculas IgG se incuban con papaína en presencia de cisteína, se dividen uno o más enlaces peptídicos en la región bisagra, produciendo tres fragmentos de tamaño similar: dos fragmentos Fab y un fragmento FC. Los fragmentos de Fc pueden separarse de los fragmentos de Fab mediante el uso de proteína A inmovilizada o mediante cromatografía de intercambio iónico.

El fragmento Fc de 50 kilodalton se utiliza a menudo para determinar la especificidad de los receptores Fc sin que ocurran interferencias de la unión del antígeno. Los fragmentos Fab son útiles en estudios inmunohistoquímicos porque los fragmentos penetran en el tejido mejor que la IgG intacta. Además, se evitan posibles uniones no específicas de los receptores Fc al utilizar solo la porción Fab de la inmunoglobulina.

La papaína también puede usarse para generar fragmentos F(ab')2. Para preparar fragmentos F(ab')2, la papaína se activa primero con cisteína de 10 mM, que luego se elimina mediante filtración en gel. Si no hay cisteína durante la digestión con papaína, se pueden generar fragmentos de F(ab')2. Estos fragmentos son a menudo poco coherentes, por lo que la reproducibilidad puede suponer un problema.

La papaína inmovilizada puede sustituirse por papaína libre en casi cualquier aplicación y ofrece una serie de ventajas, como que prácticamente elimina la autolisis, elimina la contaminación de una muestra con la proteasa y permite controlar la digestión mediante la extracción de la papaína o el control del flujo de la muestra sobre una columna de papaína inmovilizada. La papaína inmovilizada también es más estable contra la desnaturalización inducida por calor, lo que resulta en un mantenimiento más prolongado de la actividad. El kit de preparación ImmunoPure Fab contiene papaína inmovilizada, otros reactivos necesarios y un protocolo optimizado para la digestión de anticuerpos humanos, de conejo y de ratón.