El kit de expresión génica TaqMan™ Cells-to-C_T™ permite realizar análisis de expresión directamente de las células cultivadas sin necesidad de purificar el ARN. Este kit permite ahorrar tiempo y ofrece un flujo de trabajo sencillo que puede utilizarse con unas pocas muestras o incorporarse fácilmente a aplicaciones automatizadas de alto rendimiento.

El kit de expresión génica TaqMan™ Cells-to-C_T consiste en:

• Completo: el flujo de trabajo optimizado incluye reactivos de lisis celular con eliminación de ADNg, mezcla de enzimas de RT, tampón, y nueva mezcla maestra de expresión génica TaqMan™
• Rápido: preparación de muestras en 7 minutos, lo que incluye el tratamiento ADNasa a temperatura ambiente
•Sencillo: lise las muestras en un tubo o directamente en una placa de cultivo
• Sólido: realice análisis de expresión génica de entre 10–100.000 células por muestra; los resultados son equivalentes a los que se obtienen con ARN purificado
• Eficaz: contiene reactivos suficientes para generar 500 resultados de PCR en tiempo real a partir de 100 muestras iniciales

Con un método único para lisar células cultivadas, al tiempo que elimina el ADN genómico y preserva la integridad del ARN, el kit de expresión génica TaqMan™ Cells-to-C_T™ contiene reactivos de transcripción inversa (RT) para la síntesis de ADNc y la mezcla maestra de expresión génica TaqMan™ para el análisis de PCR en tiempo real. Los conjuntos Taqman™ de cebador⁄sondas se venden por separado.

Preparación de muestras sencilla en 7 minutos: parte de un flujo de trabajo completo
Ya sea que se utilicen placas o tubos, el kit Taqman™ de expresión génica Cell-to-C_T™, que utiliza el sencillo procedimiento de preparación de muestras de 7 minutos descrito (consulte la figura), está diseñado para 10–100.000 muestras⁄células cultivadas. Las células se lavan en PBS y se lisan en la solución durante 5 minutos a temperatura ambiente; el tratamiento de ADNasa se puede realizar simultáneamente. Para finalizar la lisis, las células se deben someter a un proceso de incubación de 2 minutos con solución de parada a temperatura ambiente. Los lisados ya están listos para la transcripción inversa o el almacenamiento a –20 °C. Puesto que las muestras se pueden procesar directamente en pocillos de cultivo (96 o 384 pocillos), la manipulación de las muestras y la posibilidad de pérdida de las muestras o de error de transferencia se reducen al mínimo, lo que permite disfrutar de un procesamiento de alto rendimiento rápido. A diferencia de los antiguos protocolos de aislamiento de ARN compuestos por varios pasos, con este kit no es necesario llevar a cabo ningún paso de calentamiento, lavado o centrifugación. El kit simplifica enormemente un laborioso proceso de 30–60 minutos y lo reduce a 7 minutos.

El flujo de trabajo del kit TaqMan™ para la expresión génica Cells-to-C_T™ TaqMan permite una evaluación insuperable de la expresión génica con cualquiera de los >700.000 ensayos de expresión génica TaqMan™. La especificidad de este kit ha sido ampliamente probada con una gran selección de ensayos de expresión génica TaqMan™ y muestra un rendimiento equivalente al obtenido con ARN purificado (consulte la figura).

Logre un rendimiento y una sensibilidad inigualables
A diferencia de algunos kits de la competencia que limitan la cantidad de lisado en la reacción de RT al 5 %, el kit TaqMan™ de expresión génica Cells-to-C_T™ puede acomodar el 45 % del volumen total de reacción de RT como lisado celular. Además, el ADNc puede constituir hasta el 45 % del volumen de la reacción de PCR en tiempo real. El elevado volumen de lisados en la reacción de RT optimizada, junto con el elevado volumen de ADNc que se obtiene en la posterior PCR en tiempo real con la mezcla maestra para expresión génica TaqMan™, producen una sensibilidad máxima. La mezcla maestra amplifica el objetivo de forma precisa y exacta, permitiendo la detección de pequeñas cantidades de objetivo, como transcripciones expresadas a niveles bajos.

La capacidad de detectar cantidades objetivo limitadas se probó mezclando un número constante de células humanas con varios números de células de ratón. Las mezclas de células se prepararon con el kit de expresión génica TaqMan™ Cells-to-C_T™ y se analizaron para detectar un gen específico de ratón y un gen específico de humano. Los datos comparativos se generaron de la misma forma con ARN purificado mediante la metodología tradicional. Los datos muestran que solo se podía detectar ARN de 10 células de ratón en un fondo de ARN de 10.000 células humanas (ver figura). La capacidad del kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-C_T™ para detectar transcripciones de baja abundancia relativa era equivalente a la del ARN purificado; a niveles bajos, era superior.

Además, el rendimiento del kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-C_T™ se comparó con los kits de lisado de la competencia y con el ARN purificado. Para ello, se examinaron de 100 a 100 000 células⁄reacciones de lisis. La sensibilidad del protocolo del kit TaqMan Cells-to-CT fue equivalente a la que se obtuvo con el ARN purificado y superior a la de los lisados de la competencia (ver figura).La sensibilidad del protocolo del kit TaqMan™ Cells-to-C_T™ fue equivalente a la que se obtuvo con el ARN purificado y superior a la de los lisados de la competencia (ver figura). Además, la falta de inhibición a altos insumos celulares y la baja variación entre réplicas técnicas demuestran la fiabilidad de este enfoque para estudios de expresión génica mediante células cultivadas.

Rendimiento probado y probado en conjunto
Todos los componentes del kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-C_T™ se han optimizado para ofrecer un rendimiento uniforme y fiable. Esto elimina las conjeturas asociadas con la preparación de muestras separadas, la RT y los kits de PCR en tiempo real. Y el kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-C_T™ se ha validado con ensayos de expresión génica TaqMan™ para ofrecer una mayor garantía de calidad.

Producto accesorio
El kit de control TaqMan™ Cells-to-C_T™ se ha diseñado para su uso con el kit TaqMan™ Gene Expression Cells-to-C_T™. Este kit contiene un control endógeno (ACTB) para normalizar la variabilidad de la carga de muestras y un control artificial XenoRNA™ y el correspondiente ensayo de expresión génica TaqMan™ para controlar los efectos de la inhibición de PCR.