MeltDoctor™ HRM Master Mix

La mezcla maestra de fusión de alta resolución (HRM) Applied Biosystems™ MeltDoctor™ contiene todos los componentes (a excepción de la plantilla y los primers) formulados para un rendimiento de HRM superior en una amplia gama de objetivos de genómica.El análisis mediante fusión de alta resolución (HRM) es un método de análisis post-PCR (reacción en cadena de la polimerasa) utilizado para identificar la variación genética en las secuencias de ácido nucleico.A diferencia de algunas mezclas de la competencia, la mezcla maestra de HRM MeltDoctor™ no requiere mezclas adicionales antes de su uso y ha sido desarrollada y optimizada exclusivamente para aplicaciones de HRM.
•Fluorescencia con un fondo bajo
• Brillo elevado en presencia de ADN bicatenario
• Cambio mínimo de la temperatura de fusión de ADN debido a la unión de tinte
• Estabilidad térmica para tolerar condiciones de ciclos de PCR
• Sin inhibición de la actividad de la polimerasa, lo que da como resultado una alta eficacia de PCR
• Una mezcla de dNTP (desoxinucleótidos) que incluye dUTP (2'-desoxiuridina 5'-trifosfato), lo que minimiza la contaminación cruzada al permitir la degradación del amplicón mediante uracilo-ADN glicosilasa (UDG) en posteriores reacciones de PCR

Barridos de mutaciones
Los análisis de HRM se pueden utilizar para detectar mutaciones en genes objetivo para la identificación de variantes en muestras antes de su análisis secuencial.HRM, que es una técnica de barrido de mutaciones, ofrece ventajas significativas en comparación con los métodos convencionales como la cromatografía líquida desnaturalizante de alto rendimiento (DHPLC) y la electroforesis en gel con gradiente de desnaturalización (DGGE).Específicamente, entre las ventajas de la HRM para el barrido de mutaciones, se incluyen las siguientes:
• Bajo consumo de reactivo, con poco desperdicio:El HRM solo requiere una reacción de PCR de 20 μl para el análisis de cada muestra, lo que elimina la necesidad de disolventes para HPLC o geles DGGE
• Flujo de trabajo simple y rápido: no se requiere ninguna instrumentación adicional después de la amplificación por PCR.Se puede agregar simplemente un paso de fusión de alta resolución al final del perfil de PCR para el análisis inmediato
• Optimización rápida: a diferencia de DHPLC, no es necesaria la optimización térmica
• Bajo consumo de muestra: tras el análisis de HRM, el producto de la PCR se puede usar directamente en una reacción de secuenciación por Sanger.

Componentes de calidad
• Sales de magnesio y otros componentes de tampón, formulados de manera precisa para obtener resultados óptimos de HRM.
•La ADN polimerasa AmpliTaq Gold™ 360, una ADN polimerasa muy purificada que proporciona un rendimiento de inicio en caliente, lo que minimiza la formación de productos no específicos y permite la preparación de reacciones a temperatura ambiente
• Tinte de HRM MeltDoctor™, una forma estabilizada del tinte de ácido nucleico bicatenario fluorescente SYTO™ 9 desarrollado por Molecular Probes.