Las sondas de serina hidrolasa Thermo Scientific son sondas de fluorofosfato (FP) ActivX™ y otras sondas de fosfonato marcadas para purificar o realizar ensayos de sitios activos de hidrolasa serina mediante fluorescencia, afinidad de biotina o espectrometría de masas.

Características de la sonda de hidrolasa serina TAMRA-FP ActivX:

• Específica: etiqueta el sitio reactivo de las hidrolasas serina activas.
• Compatible: etiquetas disponibles para captura, detección y conjugación Staudinger
• Flexible: uso para etiquetado de enzimas in vitro o intracelular

Estas sondas ActivX™ FP presentan un grupo de fluorofosfonatos reactivos que, de forma específica y covalente, etiquetan la serina de sitio activo de las hidrolasas serina enzimáticamente activas. Estas sondas están disponibles con una etiqueta de destiobiotina (análoga a la biotina) para el enriquecimiento selectivo, un fluoróforo TAMRA para detección o un grupo de azido reactivo (reactivos Staudinger) que facilita el etiquetado multiplex cuando se utiliza con etiquetas derivadas de fosfina o alquino. Estas sondas se pueden utilizar para evaluar la actividad o detectar inhibidores de moléculas pequeñas en enzimas derivadas de lisados celulares, fracciones subcelulares, tejidos y proteínas recombinantes.

Aplicaciones:
• Determinar la actividad enzimática de la hidrolasa serina en células y lisados
• Establecer la serina de sitio activo de miembros de la familia de hidrolasas serina funcionalmente diversos (por ejemplo, proteasas, lipasas, esterasas)
• Detectar afinidades de unión de moléculas pequeñas e inhibición del sitio activo
• Perfilar las hidrolasas serina mediante flujos de trabajo fluorescentes, Western blot o de espectrometría de masas

Las sondas de sitio activo ActivX son especialmente ventajosas para determinar los niveles de enzimas activas en comparación con otras técnicas de perfilado de expresión de proteínas que solo miden la abundancia. Debido a que muchas de las enzimas proteolíticas de la familia de la hidrolasa serina se expresan como proenzimas inactivas (zimógenos), las sondas FP ActivX enriquecen de forma selectiva solo aquellas enzimas que son funcionalmente activas y biológicamente relevantes en el momento del etiquetado. Esta característica también hace posible realizar la detección selectiva de inhibidores u otras condiciones que alteran la actividad enzimática.

Las hidrolasas serinas activas etiquetadas con sondas ActivX FP pueden detectarse y cuantificarse mediante Western blot, adquisición de imágenes de gel fluorescente o espectrometría de masas mediante una etiqueta compatible. La sonda TAMRA-FP se puede utilizar para etiquetar y detectar hidrolasas serinas activas en muestras mediante adquisición de imágenes de gel fluorescente, electroforesis capilar o espectrometría de masas. También hay disponible un anticuerpo anti-TAMRA para el inmunoenriquecimiento de proteínas etiquetadas con sonda TAMRA-FP. La sonda azido-FP se utiliza en combinación con una etiqueta derivada de fosfina o alquino para la detección o el enriquecimiento. Las sondas de destiobiotina-FP pueden utilizarse para el enriquecimiento a base de estreptavidina y la detección de proteínas de hidrolasa serina activas en Western blot o espectrometría de masas.

La superfamilia de la hidrolasa serina es una de las familias de enzimas más grandes y diversas en proteomas eucariotas. Las hidrolasas serinas generalmente se agrupan en dos grandes familias: proteasas serinas (por ejemplo, tripsina, elastasa y trombina) e hidrolasas serinas metabólicas. Las hidrolasas serinas metabólicas se dividen en múltiples subclases enzimáticas (por ejemplo, esterasas, lipasas, amidasas y peptidasas) basadas en la estructura, el mecanismo catalítico y la preferencia de sustrato.

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