Freedom™ DG44 Kit
Freedom™ DG44 Kit
Gibco™

Freedom™ DG44 Kit

El kit DG44 Gibco™ Freedom™ es un producto muy fácil de utilizar para la clonación y expresión de proteínas recombinantesMás información
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Número de catálogoCantidad
A13737011 kit
Número de catálogo A1373701
Precio (EUR)
17.060,00
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Cantidad:
1 kit
Precio (EUR)
17.060,00
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El kit DG44 Gibco™ Freedom™ es un producto muy fácil de utilizar para la clonación y expresión de proteínas recombinantes en células de ovario de hámster chino con deficiencia de dihidrofolato reductasa (DHFR-).El kit DG44 Gibco™ Freedom™ incluye componentes para transfección, expresión, creación de clones y selección de línea celular estable, todo en un práctico kit.El kit DG44 Gibco™ Freedom™ también ofrece una probada línea de células huésped con opciones de licencia comerciales simplificadas.

•Licencias comerciales flexibles sin la necesidad de derechos de autor
• Huésped probado en productos acabados y un amplio conjunto de proteínas
• Flujo de trabajo completo que puede llevar su gen de interés desde la transfección hasta la clonación principal normalmente en menos de 6 meses
• Envase cómodo para facilitar el pedido y el almacenamiento

Licencias comerciales sencillas, flexibles y sin derechos de autor
Varias empresas proporcionan servicios y productos de desarrollo de líneas celulares estables de células de ovario de hámster chino (CHO) que requieren cuotas anuales durante el desarrollo de su proteína terapéutica.Además, pueden exigirse derechos de autor por la venta de su proteína terapéutica en el momento de su comercialización.Los kits Gibco™ Freedom™ le proporcionan las herramientas que le permitirán a usted o a su proveedor de CRO desarrollar su línea celular estable por solo el precio del propio kit.Además, a medida que avance hacia el uso comercial, se dispone de una estructura de licencia flexible sin la carga de los derechos de autor y funciona para mantenerla tan simple como un pago único (figura 1).Para obtener más información sobre la concesión de licencias, envíenos un correo electrónico a outlicensing@lifetech.com.

Fondo de células huésped con resultados probados
Las células DG44 han sido una elección de los científicos durante décadas para la expresión de IgG y numerosas proteínas de la sangre.Los niveles de expresión de proteínas pueden variar significativamente dependiendo de la clase de proteína, sin embargo, los niveles de gramo por litro de expresión de IgG se han demostrado utilizando estas células parentales DG44.Por lo tanto, puede estar seguro de que, si su trabajo requiere el uso de células DG44, estas entregarán los niveles de proteína esperados.

Flujo de trabajo completo, rápido y eficiente
El kit DG44 Gibco™ Freedom™ completo, probado y totalmente integrado le permite pasar de la transfección a la clonación de plomo generalmente en menos de 6 meses, o que ayuda a reducir los requisitos de tiempo de trabajo y de equivalente de tiempo completo (FTE) (figura 2).Hemos implementado una sola ronda de amplificación de MTX (metotrexato) en el protocolo, que en nuestras manos proporcionó una mejora de valoración hasta 120 veces superior en menos de 6 semanas (figura 3).Todo el flujo de trabajo se realiza en medio libre de origen animal (AOF).El kit también ofrece las siguientes ventajas:

•Clonación de uno o dos genes que codifican sus proteínas de interés
• Transfección de alta eficacia del ADN en células DG44 (conforme a las buenas prácticas de fabricación actuales)
• Unidad flash incluida con manual

Acceso al soporte de kit Gibco™ Freedom™
Si se necesita algún soporte específico más allá del manual, póngase en contacto con su administrador de cuentas para obtener una consulta con Process Science Manager.Además, uno de nuestros científicos de apoyo puede ayudarle a asegurarse de que su experiencia con el kit sea lo más exitosa posible.Para obtener más ayuda, envíe un correo electrónico a nuestro equipo de soporte a GibcoServices@thermofisher.com.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Línea de productosFreedom
Cantidad1 kit
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Medio de CD DG44: De 2 °C a 8 °C, Metotrexato
Medio de CD OptiCHO™: De 2 °C a 8 °C, proteger de la luz
SFM OptiPRO™: De 2 °C a 8 °C, proteger de la luz
Reactivo MAX FreeStyle™: De 2 °C a 8 °C, no congelar
Pluronic™: F68 de 15 °C a 30 °C

Células negativas de suspensión procedentes de bancos según las cGMP (dihidrofolato reductasa) de DG44 (CHO): nitrógeno líquido
E. Coli químicamente competente TOP10 de One Shot™: A –80 °C
Kit de vectores TA pcDNA 3.3 TOPO™: De – 5 °C a – 20 °C
Kit de vectores TA pOptiVEC™ TOPO™: De – 5 °C a – 20°C
Gentamicina™: De – 5 °C a – 20 °C

Preguntas frecuentes

In the Freedom DG44 kit, does it matter which protein subunit is inserted into the pcDNA3.3-TOPO TA versus the pOptiVEC-TOPO TA vectors?

We recommend cloning each protein subunit into each of the vectors to determine which vector combination gives the highest protein yield in transient transfection before making the stable cell line.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

In the Freedom DG44 kit, since MTX amplification would only work for the protein subunit expressed by the pOptiVEC TOPO-TA vector, how can I ensure that the protein subunit expressed by pcDNA3.3-TOPO TA is also being amplified?

Even though the exact mechanism for MTX amplification is not well understood, the thinking is that both vectors tend to integrate in the same genomic locus and hence would get amplified at the same time.

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In the Freedom DG44 kit, the pOptiVEC-TOPO TA vector contains a DHFR auxotrophic selection marker so that one can avoid using antibiotic selection during protein production. However, this is not possible with the pcDNA3.3-TOPO TA vector as it contains a neomycin selection marker. Is it okay to have G418 present during protein production?

Using G418 should not pose a problem for low-scale protein production for initial studies. However, we do not recommend adding G418 during large-scale protein production (i.e., in a bioreactor).

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Can MTX be used at concentrations higher than 4 µM to increase protein yield using the OptiCHO Express Kit?

There are a couple of concerns associated with high MTX concentrations. One is the stability of the cell line generated using high MTX concentrations. The other is that it may be amplifying the DFHR gene without amplifying the gene of interest along with it stoichiometrically. We recommend the more conservative approach of 4 µM MTX for amplification.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

How can I learn more about commercial licensing of Freedom kits, ExpiCHO-S Cells (cGMP banked), CHO-S Cells (cGMP banked), and CHO DG44 Cells (cGMP banked)?

To inquire about a Commercial Production or Service License, please email: outlicensing@thermofisher.com.

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