GeneArt™ Synechococcus Protein Expression Vector

El vector de expresión de proteínas del Synechococcus GeneArt™ es nuestro vector de expresión de proteínas del Synechococcus de segunda generación optimizado para la expresión relativa de alto nivel en algas y con doble etiqueta de proteínas para la detección y/o purificación del gen de interés. El kit incluye vector de expresión y protocolos fáciles de seguir. Nuestro medio Gibco™ BG-11, que se vende por separado, está optimizado para el crecimiento y el mantenimiento de determinadas cianobacterias, incluida Synechococcus elongatus, disponibles en la colección ATCC.

• Expresar > 10 % de proteína soluble total de su gen de interés
• Detectar y purificar su gen de interés con etiquetas de epítopo 6His-TEV o V5-His
• Compatible con el montaje sin fisuras para la creación de construcciones

Un vector de expresión determinado específico
El vector de expresión de proteínas del Synechococcus GeneArt está diseñado para proporcionar expresión constitutiva en el Synechococcus elongatus. La expresión está controlada por el promotor psbA1, un sitio de unión al ribosoma (RBS), y codones opcionales de iniciación y parada en función de la ubicación del gen. El vector proporciona etiquetas de purificación y detección en los extremos con terminación de tipo N y C-terminal: una etiqueta de polihistidina con terminación de tipo N con un sitio de reconocimiento de TEV para la escisión opcional y un epítopo con terminación de tipo C V5 seguido de una etiqueta de polihistidina. Dos sitios de MCS proporcionan la flexibilidad para adjuntar ambas o ninguna etiqueta a su proteína. Nuestro vector pSyn_6 también es compatible con la clonación sin costuras, un método de clonación opcional que no produce secuencias adicionales en su construcción final.

Las características del vector incluyen:
• Promotor constitutivo fuerte, psbA1, para la expresión robusta del gen recombinante de interés
• Sitio de unión del ribosoma (RBS) para la expresión mejorada de algunos genes
• Integración dirigida de su gen de interés en el genoma de Synechococcus elongatus
• Etiquetas de epítopo con terminación de tipo N 6His-TEV y C-terminal V5-6His
• Gen de resistencia a la espectinomicina para la selección en Synechococcus
• Vector flexible de sitio de clonación múltiple

Eficiencia de integración >80 %
La transformación de Synechococcus elongatus PCC7942 se basa en la recombinación homóloga entre el cromosoma celular y el ADN exógeno que no se replica de forma autónoma y contiene secuencias homólogas al cromosoma. La localización de la integración en el cromosoma (sitio neutro, NS1) se desarrolló como un locus de clonación, ya que puede ser interrumpido sin ningún fenotipo aberrante, permitiendo así la recombinación de secuencias ectópicas. Cuando se transforma con vectores que contienen un casete de resistencia a antibióticos y secuencias de sitio neutro, se produce un doble evento homólogo de recombinación entre el vector de sitio neutro y el cromosoma de Synechococcus elongatus. El marcador selectivo (espectinomicina) y el gen de interés impulsado por un promotor se insertan en el sitio neutro y se pierde la columna vertebral del vector (PUC), permitiendo la expresión de genes recombinantes en Synechococcus elongatus PCC 7942.

Medio Gibco BG-11, optimizado para cianobacterias
Medio Gibco BG-11, disponible por separado, está optimizado para el crecimiento y mantenimiento de determinadas cianobacterias, incluida Synechococcus elongatus. La formulación 1X le permite evitar laboriosos pasos de preparación de medios. El galardonado diseño de la botella es más fácil de usar en la cabina de bioseguridad, minimiza el riesgo de contaminación y ayuda a realizar cultivos celulares de forma más uniforme. El embalaje y la calidad superiores, la mayor fiabilidad y la mejor uniformidad en el cultivo de cianobacterias dan como resultado una mayor eficiencia general y datos más sólidos.