El ensayo celular GeneBLAzer™ PPAR alfa-UAS-bla HEK 293T proporciona un método preciso, sensible y fácil de usar para controlar la respuesta celular del PPAR alfa a candidatos a medicamentos u otros estímulos.

Características del ensayo celular GeneBLAzer™ PPAR alfa-UAS-bla HEK 293T:
• Comodidad: coloque las células en placas y realice el ensayo sin pasos adicionales de cultivo celular
• Ruido bajo: el kit utiliza una lectura radiométrica basada en la transferencia de energía de resonancia fluorescente (FRET) para obtener el mínimo ruido y errores
• Fondo bajo: la fusión GAL4 evita cualquier fondo del receptor endógeno

Las células
Las células GeneBLAzer™ PPAR alfa-UAS-bla HEK 293T contienen el dominio ligando-vinculante (LBD) del receptor alfa activado por el proliferador de peroxisoma humano (PPAR alfa) fusionado con el dominio ADN-vinculante de GAL4 transducido transitoriamente (a través del virus BacMam) a la línea celular GeneBLAzer™ UAS-bla HEK293T. Las células GeneBLAzer™ UAS-bla HEK 293T expresan de manera estable un gen indicador de β-lactamasa bajo el control transcripcional de una secuencia activadora ascendente (UAS).

El ensayo
Cuando un agonista se une a la LBD de la proteína de fusión GAL4 (DBD)-PPAR alfa (LBD), la proteína se une a la UAS, dando como resultado la expresión de β-lactamasa. La lectura radiométrica FRET del sustrato de células vivas reduce los errores absolutos y relativos que pueden enmascarar la respuesta biológica subyacente de interés. Las células PPAR alfa UAS-bla HEK 293T se han probado para determinar el rendimiento del ensayo con condiciones de ensayo variables, incluyendo el número de células, el tiempo de estimulación y el tiempo de carga del sustrato, y se han validado para las concentraciones Z′ y EC₅₀ de GW7647. También se dispone de datos de pruebas adicionales con estímulos alternativos. Consulte el «paquete de validación» en los documentos siguientes para ver los datos.

Velocidad y comodidad
Puesto que las células PPAR alfa UAS-bla HEK 293T son transducidas transitoriamente con el virus BacMam, están listas para usarse en un ensayo sin ningún paso adicional de cultivo celular. Solo tiene que hacer la placa de las células y el ensayo como se describe en el protocolo.

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