Pierce™ 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set
Thermo Scientific™

Pierce™ 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set

Le kit de coloration pour le marquage des protéines avec 6xHis Thermo Scientific Pierce est une coloration fluorescente pour laAfficher plus
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RéférenceQuantité
245701 L
Référence 24570
Prix (EUR)
490,00
Each
Quantité:
1 L
Grand volume ou format personnalisé
Prix (EUR)
490,00
Each
Le kit de coloration pour le marquage des protéines avec 6xHis Thermo Scientific Pierce est une coloration fluorescente pour la détection préférentielle des protéines de fusion recombinantes marquées à l’histidine (His) dans des gels de polyacrylamide protéiques.

La coloration fluorescente unique détecte spécifiquement les protéines de fusion marquées à l’histidine qui ont été électrophorées dans des gels de polyacrylamide (p. ex. SDS-PAGE). Avec cette coloration, l’expression des protéines recombinantes marquées His peut être évaluée directement dans le gel, éliminant ainsi le transfert de membrane et les étapes de transfert Western généralement utilisées pour confirmer la pureté et le rendement des protéines marquées. Bien que la limite inférieure de détection dépende de la lampe UV (300 nm) et de l’équipement de détection (caméra CCD recommandée) utilisés, le colorant est pratique pour l’évaluation en cours de traitement de la production de protéines marquées His et est compatible avec la coloration ultérieure avec le colorant Coomassie et d’autres colorations totales de protéines.

Caractéristiques du kit de coloration pour le marquage des protéines avec 6xHis :

Deux à trois fois plus rapide que le transfert Western : obtenez des résultats plus tôt et économisez de précieuses heures de temps de recherche
Détecte directement sur le gel : peut éliminer le besoin d’un transfert de membrane et d’une étape de transfert Western pour la détection d’au moins 0,2 µg de protéines marquées 6xHis
Prêt à l’emploi, formule à deux réactifs : sans mélange, sans dilution, ni complication ; garantit un protocole de détection simple à exécuter sans erreur
Détection fluorescente spécifique de protéines marquées 6xHis : ne voyez que ce que vous voulez voir (caméra CCD recommandée pour les protéines de faible abondance ; transilluminateur UV pour les protéines abondantes)
Compatible avec la double coloration : suivez la coloration des protéines marquées His avec le réactif de coloration bleu GelCode Thermo Scientific pour une détermination totale du profil protéique

Comprend :
• Solutions de colorant et de développeur (500 ml chacune)

Nécessite :
• Source de lampe UV (300 nm) et caméra CCD
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
DescriptionKit de réactifs de colorants pour le marquage des protéines avec 6xHis Pierce
Emplacement de détectionDétection sur gel
Méthode de détectionFluorescent
Quantité1 L
Molécule cibleProtéines (marquées His)
Marqueur ou colorantMélange exclusif
Gamme de produitsPierce
Type de produitKit de coloration des protéines de marqueur His
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Stocker les composants à température ambiante.Le produit est expédié à température ambiante

Foire aux questions (FAQ)

I used the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set to detect my 6xHis-tagged protein but am also detecting non-tagged proteins. Why is this?

This is likely due to weak cross-reaction staining of proteins containing histidine clusters. Here are our recommendations:

- Wash gel for additional time in water (step 5.)
- Slightly decrease staining time (step 2.)
- Adjust exposure time and other settings to minimize weak, non-specific staining.

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With the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set, I was able to detect the positive control but not the experimental protein. What happened?

Here are possible causes and solutions:

- Experimental protein not expressed at sufficient levels in the lysate being tested. Load more lysate per lane or otherwise check that the target protein is expressed at all.
- Experimental recombinant protein is not tagged with 6xHis. Check for presence of tag by an independent method (e.g., detection or purification by nickel-chelate chemistry.
- 6xHis tag on experimental protein is blocked by interfering substances in sample. Verify that nickel and other 6xHis-binding reagents were not brought forward from a previous step and use only high-quality water.

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I used the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set but was not able to detect any bands for either the positive control or experimental protein. What possibly went wrong?

Here are possible causes and solutions:

- Poor quality or insufficient exposure to appropriate UV-light source. If possible, use a CCD camera for detection; ensure that UV lamp delivers the appropriate wavelength for excitation (280-310 nm).
- Experimental protein is poorly expressed (insufficient loading). Insufficient protein was electrophoresed per lane for the detection method used.
- Insufficient washing; residual SDS in gel prevents binding of stain. Wash gel for 3 × 20 minutes in ultrapure water and restain .
- Experimental protein is small (less than 20kDa) and diffused from gel during washing step. Fix the gel 50% methanol:7% acetic acid for 15 minutes before performing the water wash.
- Poor diffusion of stain into gel. Increase staining time to 10 minutes (step 2); this may be repeated on the same gel.

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With the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set, how long will the fluorescent signal remain stable after the gel is stained'?

The fluorescent signal is stable for several hours in gels stored in water. Signal may be detectable, if somewhat attenuated, after overnight storage.

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Is there a fixation step in the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set staining procedure?

There is no fixation step in the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set staining procedure. Hence, staining with this kit does not inhibit subsequent total protein staining with general protein stains, or electrophoretic transfer to membrane. Note: Bis-Tris gels run in MOPS or MES buffer may require fixing in 50% methanol: 7% acetic acid for 15 minutes before performing the stain procedure. After electrophoresis, fix the gel and then proceed with Step 1 of the procedure.

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