Oligo(dT)₂₅ Dynabeads™

Les microbilles d’isolement de l’ARNm Dynabeads™ Oligo(dT)₂₅ ciblent et capturent spécifiquement les molécules d’ARNm de quasiment tout échantillon brut et éliminent le besoin de purifier l’ARN total lorsque l’acide nucléique détenteur des informations souhaitées est l’ARNm. Étant donné que l’ARNm comporte seulement environ 1 à 5 % d’ARN cellulaire total, l’isolement de l’ARN total ne constitue pas la manière la plus efficace d’isoler l’ARNm. D’autres technologies conçues pour purifier l’ARN total produisent ∼ 80 % d’ARN ribosomal et obligent l’ARNm à entrer en concurrence avec l’ARN ribosomal, l’ARN de transfert, le micro-ARN, le petit ARN nucléolaire et le petit ARN cytoplasmique pour une liaison avec la membrane. Avantages des microbilles Dynabeads™ Oligo(dT)₂₅ :

• Procédure rapide et non agressive qui produit de l’ARNm intact et pur
• Isolement de l’ARNm extrêmement pur, meilleur choix en amont de la synthèse de l’ADNc
• L’isolement de l’ARNm extrêmement sensible permet la synthèse de l’ADNc et la construction de bibliothèques d’ADNc à partir d’échantillons de départ extrêmement petits (permet la construction de bibliothèques d’ADNc à partir d’une seule cellule)

Fonctionnement des microbilles
Les microbilles enduites d’oligo(dT)₂₅ Dynabeads™ ciblent spécifiquement et capturent le transcriptome d’ARNm à partir d’une très grande variété d’échantillons de départ bruts. L’ARN ribosomal, l’ADN, les protéines et les petites molécules d’ARN (ARN de transfert, micro-ARN et petits ARN nucléolaires) ne se fixent pas aux microbilles et sont éliminés. Seules les espèces d’ARN polyadénylé (ARNm) sont capturées. L’ARNm isolé est pur, ce qui élimine le besoin d’une soustraction d’ARN ribosomal ou d’un traitement à la DNase post-extraction. Ce système sans colonne assure une récupération optimale de transcriptomes :

• Capture d’ARNm physique sur des microbilles magnétiques mobiles
• Procédures de manipulation magnétique rapide et non agressive
• Aucun ARNm perdu pendant les centrifugations à forte force g
• Aucun ARNm piégé dans les membranes de colonne pendant l’élution

Applications
L’ARNm convient à toutes les applications moléculaires en aval, y compris le clonage de gènes, la synthèse d’ADNc, la construction de bibliothèques d’ADNc, la RT-PCR, la RT quantitative, la RPA (Ribonuclease Protection Assay, ou Analyse de protection contre la ribonucléase), hybridation soustractive, extension d’amorce, SAGE, RACE, etc. Les microbilles d’isolement de l’ARNm Dynabeads™ Oligo(dT)₂₅ sont la méthode de purification d’ARNm idéale avant la construction de bibliothèques d’ADNc. L’utilisation de ces microbilles permet les meilleurs taux de récupération et d’enrichissement du transcriptome. Ces microbilles capturent plus du transcriptome que possible avec des méthodes qui intègrent une étape d’isolement d’ARN total en amont de l’isolement d’ARNm.

Options d’élution Verastile
L’élution peut être effectuée dans n’importe quel volume jusqu’à 5 μl. L’élution de l’ARNm est facultative car les réactions enzymatiques dans les procédures en aval ne sont pas inhibées par la présence de Dynabeads™. En outre, la synthèse d’ADNc peut s’effectuer directement sur les microbilles afin de créer une bibliothèque d’ADNc en phase solide réutilisable.